AiiA融合蛋白包涵体变性和复性的研究.pdfVIP

维普资讯 第 24卷 第 4期 福建师范大学学报 (自然科学版) Vo1．24 No．4 2008年 7月 JournalofFuiianNormalUniversity (NaturalScienceEdition) Ju1．2008 文章编号：1000—5277(2008)04—0076—04 AiiA融合蛋白包涵体变性和复性的研究 杨 梅h，郭丽清 ，关夏玉 ，张 峰 ，林彬辉 ，陈新华 ，黄志 (1．福建农林大学生物农药与化学生物学教育部重点实验室，福建 福州 350002； 2．福建师范大学生命科学学院，福建福州 350108) 摘要：通过IPTG诱导含有pGEXaiiA-B15质粒的工程茵使其大量表达AliA融合蛋白。由于所表达的融 合蛋 白多为不可溶的包涵体，须经分离、变性溶解，再经过一个合适的复性过程才能实现变性蛋 白的正确折 叠，得到具有生物活性的蛋白．通过含Ⅳ一十二烷基肌氨酸钠的缓冲液A溶液及尿素等变性剂使包涵体溶解， 磷酸盐缓冲液透析复性．SDS电泳表明包涵体已由不可溶转化成可溶的蛋白．抑茵试验证明复性后的 AliA蛋白对胡萝 卜欧文氏软腐病茵引起的马铃薯软腐病有较明显的抑制作用． 关键词：苏云金芽孢杆茵；AliA蛋白；变性；复性 中图分类号：Q932 文献标识码：A Studyon Inclusion Body’SDenaturation and Renaturation ofAiiA Fusion Protein YANG M ei～，GUO Li—qing ，GUAN Xia—yu ，ZHANG Feng ， LIN Bin—hui，CHEN Xin—hua 。HUANG Zhi—peng (1．KeyLaboratoryofBiopesticideandChemicalBiology，FujianAgricultureandForestryUniversity， MinistryofEducation，Fuzhou350002，China； 2．CollegeofLifeSciences，FujianNormalUniversity，Fuzhou350108，China) Abstract：TherecombinantexpressionvectorspGEX口 A—B15wereusedtoexpressthe AiiA fusionproteininEscherichiacoliBL21afterinductionwithIPTG．Duetotheexpressed fusion protein aretheinsolubleinclusion body，itmustbeseperated，denaturated and re— foldedcorrectlyafteraproperrenaturationinordertoobtaintheproteinwith biologicalac— tivity．T’heinsolubleinclusionbodywasdenaturedwithUreaandN—LauroylSarcosineSodi— um andthenwasrenaturedafterthedialysiswiththephosphatebuffersolution．SDS—PAGE indicatedthattheinclusionbodyaftertheabovetreatmenthadturnedtosolubleprotein．By bacteriostaticexperiment，theresultshowedthatAiiA proteinafterrenaturationhadasig—