不同培养时期的大肠杆菌和枯草芽孢杆菌间发生的跨属自然遗传转化.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 !（）： # ’#( ) ’# 年 月 日 $%% $ ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ ! *+,+-.+/ $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 不同培养时期的大肠杆菌和枯草芽孢杆菌间 发生的跨属自然遗传转化 王小娟，李美菊，陈向东 ，谢志雄，沈 萍 （武汉大学 生命科学学院 武汉 !(%%$ ） 摘 要：携带穿梭质粒的大肠杆菌与作为受体的枯草芽孢杆菌分别培养至不同生长阶段混合均匀后静置!% -9， 涂布选择性平板， 培养 后得到一定数目的转化子， 敏感实验证实质粒是通过自然遗传转化而非其 ( D (% ; *E6F+ ! 它形式发生转移。实验发现大肠杆菌可以在特定生长时期向胞外分泌*EG，并且在对数期具有最高的提供质粒的 能力，而生长后期的细胞因为体系中*E6F+ 量的增加转化频率下降。进一步的研究发现枯草芽孢杆菌在营养丰富 的HI 培养基中也具有与基本培养基中相当的转化能力，并且在对数生长前期具有较高的转化频率。 关键词：穿梭质粒；大肠杆菌；枯草芽孢杆菌；自然遗传转化 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） J2# G %%%3#$%’ $%% %#3%’#(3%4 自然遗传转化（ ）是 在研究证实枯草芽孢杆菌细胞 细胞间自然遗 6K?/61 L++K9, K/6FMB/-6K9B 3 ［，］ 指同源或异源的“裸露” 分子被自然感受态细 2 ’ *EG 传转化现象的基础上 ，本研究进一步发现在不添 ［］ 胞主动摄取，并得到表达的水平基因转移过程 。 加外源*EG 的情况下，大肠杆菌携带的穿梭质粒可 传统上实验室进行的自然遗传转化多采用提取的游 通过细胞间自然遗传转化跨属转移到枯草芽孢杆菌 离*EG，对转化的研究也历来只以受体为主体，一 中，并且这种细胞 细胞间自然转化在不利于枯草 A 般不涉及*EG 供体以及供体、受体细胞间的接触。 芽孢杆菌建立自然感受态的丰富培养基中也具有较 自 世纪 年代以来，随着基因重组技术的迅速 $% 2% 高的频率。这不仅将有助于揭示自然转化过程在生 发展及遗传工程微生物在工业、农业、医药、环保等 物进化及环境生态方面的生物学意义，而且也可为 方面日益广泛的应用，出于生态和安全上的考虑，人 正确评估遗传工程微生物（ ）的生态安全提供