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十五、亚慢性经皮毒性试验 Subchronic Dermal Toxicity Test 1 范围 本规范规定了啮齿类动物亚慢性经皮毒性试验的基本原则、要求和方法。 本规范适用于检测化妆品原料的亚慢性经皮毒性。 2 规范性引用文件 OECD Guidelines for Testing of Chemicals (No. 411, May 1981 ) 3 试验目的 在估计和评价化妆品原料的毒性时，获得受试物急性经皮毒性资料后，还需进行亚慢性经皮毒性试验。通过该试验不仅可获得在一定时期内反复接触受试物后可能引起的健康影响资料，而且为评价受试物经皮渗透性、作用靶器官和慢性皮肤毒性试验剂量选择提供依据。 4 定义 4.1 亚慢性经皮毒性(Subchronic dermal toxicity) 是指在实验动物部分生存期内，每日反复经皮接触受试物后所引起的不良反应。 4.2　无有害作用水平 ( No-adverse-effect level ) 是指在试验中不引起任何有害作用的最大染毒剂量。用每日每单位动物体重给予受试物的重量（mg/kg）表示。 5 试验的基本原则 以不同剂量受试物每日经皮给予各组实验动物，连续染毒90d，每组采用一个染毒剂量。染毒期间每日观察动物的毒性反应。在染毒期间死亡的动物要进行尸检。染毒结束后对所有存活的动物均要处死，并进行尸检以及适当的病理组织学检查。 6 试验方法 6.1 受试物 若受试物为固体，应将其粉碎并用水（或适当的介质）充分湿润，以保证受试物与皮肤有良好的接触。若采用介质，应考虑该介质对受试物皮肤通透性的影响。液体受试物一般不用稀释。 6.2 实验动物和饲养环境 6.2.1 动物种系的选择 　　可采用成年大鼠、家兔或豚鼠进行试验，也可使用其它种属的动物。当亚慢性试验作为慢性试验的预备试验时，则在两项试验中所使用的动物种系应当相同。 6.2.2 动物的性别和数量 　　每一剂量组实验动物至少应有20只（雌雄各半），皮肤健康。若计划在试验过程中处死动物，则应增加计划处死的动物数。此外，可另设一追踪观察组，选用20只动物（雌雄各半），给予最高剂量受试物，染毒90d，全程染毒结束后继续观察一段时间（一般不少于28d），以了解毒性作用的持续性、可逆性或迟发毒作用。 6.2.3 饲养环境 实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。选用常规饲料，饮水不限制。 6.3 剂量分组 试验时至少要设三个染毒组和一个对照组。除不接触受试物外，对照组的其它条件均与试验组相同。最高染毒剂量的设计应在引起中毒效应的前提下又不致造成动物过多死亡，否则将会影响结果的评价。低剂量组应不出现任何毒性作用。若掌握人群接触水平，则最低染毒剂量应高于人群的实际接触水平。中间剂量组应引起较轻的可观察到的毒性作用。若设多个中间剂量组，则各组的染毒剂量应引起不同程度毒性作用。在中、低剂量组和对照组中，动物死亡率应很低，以保证得到有意义的评价结论。 若受试物引起严重的皮肤刺激效应，则应降低受试物的使用浓度，尽管这样可导致原来在高剂量下出现的其它毒性作用减弱或消失。若在试验早期动物的皮肤受到严重损伤，则有必要终止试验，并使用较低的浓度重新开始试验。 本项试验中，如果接触水平超过1000mg/kg时仍未产生可观测到的毒性效应，而且可以根据相关结构化合物预期受试物毒性时，可以考虑不必进行三个剂量水平的全面试验观察。 6.4 试验步骤 　　动物在试验前至少要在实验室饲养环境中适应5d时间。染毒前24h，将动物躯干背部染毒区的被毛剪掉或剃除。大约每周要对染毒部位去毛。在使用剪刀或剃刀进行去毛时应特别小心，以防损伤动物的皮肤从而引起皮肤通透性的改变。染毒部位的面积不应小于动物体表面积的10%，应通过对动物体重的测定确定染毒部位的面积。若受试物毒性较大，则可相对减小染毒区域的面积，但受试物应尽可能薄而均匀地涂敷于整个染毒区域。在染毒操作期间应使用玻璃纸和无刺激的胶带将受试物固定，以保证受试物与皮肤有良好的接触，并防止动物舔食。 在90d试验期间，实验动物最好是每周7d每天染毒6h，然而出于可行性的考虑，每周进行5d染毒也是可以的。追踪观察组则要多进行28d观察，以了解毒性作用的持续性、可逆性及迟发毒作用。 6.5 临床观察 　　试验中每天至少应进行一次仔细的临床检查。 观察期间对动物的任何毒性表现均应记录，记录内容包括发生时间、程度和持续时间。笼边观察应至少包括如下内容：皮肤和被毛的改变、眼和粘膜变化、呼吸、循环、植物神经和中枢神经系统、肢体运动和行为活动等改变。应计算每周饲料消耗量，记录每周体重变化。 6.6 临床检查 6.6.1 眼科检查 在动物染毒前和染毒后，最好对所