大鼠下丘脑腹外侧视前区和结节乳头体核团的双向纤维投射分析.pdfVIP

大鼠下丘脑腹外侧视前区和结节乳头体核团的双向纤维投 射分析 睡眠和觉醒过程不仅仅是某个神经核团的单独活动,而且是全脑众多神经核团的集 体活动( 网络活动)过程.研究[1 -2]结果表明,下丘脑腹外侧视前区(ventrolateral preoptic nucleus,VLPO)与结节乳头体核(tuberomammillary nucleus,TMN)分别是促睡眠中枢和促 觉醒调节中枢之一.80% 的 VLPO 神经细胞为 γ-氨基丁酸(GABA)能神经细胞和甘丙 肽能神经细胞,而 TMN 是脑中组胺能神经细胞胞体集中聚集的区域,这两个核团之间是 否存在直接的双向纤维投射以及其递质释放对睡眠 - 觉醒节律的形成与维持起何作用 是目前研究的热点.为了进一步证实 VLPO 和 TMN 核团是否存在双向纤维投射,该研 究通过脑立体定位技术,在大鼠的 VLPO 和 TMN 脑区分别微量注射荧光探针 Fast DiO[3](一种可被纤维末梢吞噬,通过轴浆运输达到胞体的荧光探针),观察 TMN 和 VLPO 脑区神经细胞是否表达荧光. 1 材料与方法 1. 1 材料 1. 1. 1 实验动物 清洁级成年 SD 大鼠 32 只,雌雄不拘,体重 250 ~300 g,安徽医科 大学实验动物中心提供.所有动物随机分组,对照组(12 只)(ACSF 组,VLPO 与 TMN 均 微量注射 ACSF),实验组(各10 只):① TMN + ACSFVLPO + DiO 组(TMN 内微量注 射 ACSF 以及 VLPO 内微量注射 Fast DiO);②TMN + DiOVLPO + ACSF 组( TMN 内微量注射 FastDiO 以及 VLPO 内微量注射 ACSF) .大鼠均置于室温 22 ~24 ℃,湿 度维持 55% 以及 12 h 明/ 暗(光照08 ∶00 - 20 ∶00) 的通风环境中单独饲养, 自由 饮水与摄食,活动不受限制. 1. 1. 2 药品与剂量 细胞膜荧光探针 Fast DiO( Ex= 644 nm,Em = 663 nm,分子 量:881. 72 ( 美国 LLC 公司);戊巴比妥钠(中国医药集团上海化学试剂采购供应站分装 厂进口分装提供),使用前用 ACSF 配置;ACSF 成分(mmol/L):124 NaCl,4. 5 KCl,1. 6NaH2PO4,2. 1 MgCl2,2. 7 CaCl2,26 NaHCO3,10Glucose(pH = 7. 4). 1. 1. 3 主要仪器 脑立体定位仪( 深圳瑞沃德公司);ZH-GSZ 高速颅骨钻(淮北正华 公司);MODEL828 pH 计 ( 美 国 Orion 公司); 微量注射器 ( 瑞士Hamilton 公司); Leica 冰冻切片机 ( 德国 Leica 公司);荧光显微镜( 日本Nikon 公司). 1. 2 方法 1. 2. 1 动物手术 大鼠经戊巴比妥钠(50 mg /kg)腹腔注射麻醉后,将其头部固定于脑 立体定位仪上,常规头部备皮,无菌手术操作暴露颅骨并用 0. 3%H2O2 烧灼清洁颅骨表 面,将两个不锈钢引导管(22-gauge)按照 Paxinos 和 Waston 大鼠脑立体定位图谱[4]分 别插入 VLPO(AP: -0. 36 mm;R:1. 30 mm;H:- 7. 00 mm) 和 TMN(AP: - 3. 96 mm;R:1. 50mm;H:- 7. 70 mm),引导管底端距目的核团 2 mm,供 VLPO 和 TMN 内微量注射荧光 探针使用.注射完毕后,逐层缝合,送回动物室, 自由饮水进食.术后将大鼠置于记录室中休 息,待麻醉苏醒后观察动物行为活动. 1. 2. 2 药物注射 使用 Hamilton 微量注射器( 针尖直径 26-gauge)通过引导管向目 的核团注射 ACSF(对照组)或含荧光探针