兔受精卵显微注射外源基因外体外培养的卵裂发育.pdfVIP

维普资讯 I蚴 I一 ＼ 。 卓物拄n来olc5(5)lI3一I5’I995 tech ~ 兔受精卵显微注射外源基因后体外培养的卵裂发育’ 和协超 唐 向辉 陈云鹤 (中辩嚏臣啊动 曲研究所 l星明】 孙茂盛 (医辩院医学生 曲研究所，昆啊) 从超数排卵的 l4只母兔获辞 438枚受精卵．卵者}16～22小时．显擞挺砟在蒂微 分干涉和相差的Niko．倒置显碰镜下进 行．注射针的尖端外径 0．5,urn，离尖端 4O和 8Om 处的外径分别为 4．2和 65m．注射甩外源基 因是绵羊生长激素基 固与 MT一 1启动基 固藕连 的线状 DNA溶液 (1ng／~1)．140枚注射竹受精卵和未注射的 145牧 受精卵(对照)．在Ham’sF—lO培养液(补充生长日子)中培养(38℃，5“的C )．结 果，培养48小时后，注 射组卵裂发育率分别是：未卵裂 7．9 (11／140)、卵裂至 2～4 细胞期 l1．0 (iS／l40)、卵裂至 8～l6细胞期 8O．7 (1l3／140)。对照组相应 的卵裂 率分别是 4．1 (s／145)、l2．4 (18／145)和 83．4 (121／145)。两组卵裂发育率相 近 ．本实验 的显擞操作对注射后卵的发育没有产生 明显的伤害影响。 关键调 转基因兔 卵裂率}体外培养 目前除了对各种转基因鼠模型等基础研 、 2．外 源基 因：金属硫蛋 白基 因启动子 究外，转基因家畜已先后产生 ，如兔、猪、羊和 (MT一1)与羊生长激 素基因 (oGH gene)藕 牛等 “]。但转基因的成功率还很低 ]。 连的线状 DNA，被混悬于蝗冲液(1OmM 一 般认为．提高外源基因的整合率，获得表型 NaC1，0．1mM EDTA和 5ram trispH7．4)， 良好而又稳定遗传的转基因动物纯合体，是 DNA lng／~l。 转基因成功的关键 问胚伽．由于显微操作对 3．显徽操作用玻璃针：用 日本 GD7-l 受精卵造成的损伤 ．可在早 期的卵裂发育能 玻璃管 ，在徽吸管拉制仪 (Micropipettepuller 力上反映出来。为此，本实验采用外径较细的 PB一7)上拉制 。注射玻璃针拉成尖端外径约 显微注射针导入外源基因后 ，对受精卵在体 0．5m．离尖端 4Om处外径约 4．2m，离尖 外培养下早期卵裂发育的影响进行观察，为 端 80m处外径约6。5m。固定受精卵的微 提高转基因后的胚胎成活率及移植出生率， 吸管用 自制的铂金丝撤型热源上拉制．玻璃 在显徽注射操作方面摸索更合适的技术条 管先拉成外径约 6O～8Oura．使断 口平整 ，然 件 ，有着重要意义 。 后在体视显徽镜监视下 ，把玻璃管的断 口部 位靠近微型热源至熔点处 ．使断 口部位烧 四 材料与方法 精 ，入孔内径约烧成 2O～3Om．