兔尿激酶型纤溶酶原激活物(u-PA)酶联免疫分析试剂盒使用说明书.pdfVIP

尿激酶型纤溶酶原激活物（u-PA）酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 产品编号：E0140Rb 本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断! 预期应用 ELISA 法定量测定兔血清、血浆、细胞培养物上清或其它相关液体中尿激酶型纤溶酶原激 活物（u-PA ）含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中 u-PA 水平。用纯化的抗体包被微孔 板，制成固相抗体，往包被抗体的微孔中依次加入u-PA 抗原、生物素化的抗兔u-PA 抗体、HRP 标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB 显色。TMB 在过氧化物酶的催化下转化成蓝色， 并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的u-PA 呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度 （OD 值），计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 1. 酶联板：一块 （96 孔） 2. 标准品 （冻干品）：2 瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml ，盖好后静置10 分钟以上， 然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为 10,000 pg/mL ，做系列倍比稀释后，分别稀释成 10,000 pg/mL，5,000 pg/mL ，2,500 pg/mL，1,250 pg/mL，625 pg/mL，312 pg/mL，156 pg/mL ， 其原液直接作为最高标准浓度，样品稀释液直接作为标准浓度0 pg/mL ，临用前15 分钟内 配制。 如配制5,000 pg/mL 标准品：取0.5ml 10,000 pg/mL 的上述标准品加入含有0.5ml 样品稀释 液的Eppendorf 管中，混匀即可，其余浓度以此类推。 3. 样品稀释液：1×20ml/瓶。 4. 检测稀释液A ：1×10ml/瓶。 5. 检测稀释液B ：1×10ml/瓶。 6. 检测溶液A ：1×120ul/瓶 （1：100）临用前以检测稀释液A 1：100 稀释，稀释前根据预先 计算好的每次实验所需的总量配制（每孔 100ul ），实际配制时应 配制 0.1-0.2ml 。如 1ul 检测溶液A 加99ul 检测稀释液A 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内配制。 7. 检测溶液B ：1×120ul/瓶 （1：100）临用前以检测稀释液B 1：100 稀释。稀释方法同检测 溶液A 。 8. 底物溶液：1×10ml/瓶。 9. 浓洗涤液：1×30ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25 倍。 10. 终止液：1×10ml/瓶 （2N H SO4 ）。 2 标本的采集及保存 1．细胞培养物上清：请离心后收集上清，并将标本保存于-20℃，且应避免反复冻融。 2 ．血清：标本请于室温放置2 小时或4℃过夜后于1000 x g 离心20 分钟，取上清即可检 测，或将标本放于-20 ℃保存，但应避免反复冻融。 3．血浆：可用EDTA 或肝素作为抗凝剂，标本采集后30 分钟内于2 - 8 C 1000 x g 离心15 分钟，或将标本放于-20 ℃保存，但应避免反复冻融。 注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。 操作步骤 实验开始前，请提前配置好所有试剂，试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。 每次检测都应该做标准曲线。如样品浓度过高时，用样品稀释液进行稀释，以使样品符合试剂 盒的检测范围。 1. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100ul ，余孔分别加标准 品或待测样品100ul ，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁， 轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120 分钟。 为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。 2. 弃去液体，甩干，不用洗 。每孔加检测溶液A 工作液 100ul （取1ul 检测溶液A 加99ul 检测稀释液A 的比例配制，轻轻混匀，在使用前一小时内