利用SUMO融合系统高效表达可溶性重组蛋白的研究.pdfVIP

第39 卷第10 期 东 北 农 业 大 学 学 报 39(10): 57~62 2008 年 10 月 Journal of Northeast Agricultural University Oct. 2008 文章编号 1005－9369 （2008）10－0057－06 利用SUMO 融合系统高效表达可溶性重组蛋白的研究 姜媛媛，尹成凯，李晋南，任桂萍，张 薇，李德山* （东北农业大学生命科学学院，哈尔滨 150030） 摘 要：利用pSUMO 表达载体在大肠杆菌中高效可溶性表达若干种外源蛋白，如鼠源成纤维细胞生长因子 （FGF）-21、人源FGF-21、人源白细胞介素（IL）-1β ，并与pET-30a （+）及pTYB11 表达系统作比较。将鼠源FGF- 21、人源FGF-21 及人源IL-1β 基因分别亚克隆至pSUMO 表达载体上，在大肠杆菌Rosetta （DE3）中诱导表达，并 用镍离子螯合柱（Ni-NTA）纯化重组蛋白，透析后利用SUMO 蛋白酶I 切割融合蛋白，获得纯度较高的成熟蛋白。 上述基因在pET-30a （+）及pTYB11 中表达量极低，考马斯亮蓝染色几乎检测不到。在pSUMO 表达体系中这些基 因均以可溶形式表达，且可被SUMO 蛋白酶I 有效的切割，获得纯度较高的成熟蛋白。上述蛋白可在pSUMO 表达 系统中获得高效可溶性表达。 关键词：SUMO ；SUMO 蛋白酶；分子伴侣；pTYB11 ；pET-30a （+）；表达 中图分类号：Q786 文献标识码：A 利用大肠杆菌生产多肽类药物具有成本低、 在此过程中，我们也摸索了许多诱导条件，如 周期短且不存在病毒致癌基因污染等优点，因此 IPTG 浓度、诱导时摇床转速、诱导时间及温度等， 大肠杆菌是目前基因工程中生产多肽类药物的主 但均未取得较好的表达效果。 [1-2] 要工程菌之一 。多肽类药物生产关键环节之一 SUMO （Small Ubiquitin-like Modifier-1）是一种 是选用合适的表达载体，目前已建立了多种原核 小分子泛素样修饰蛋白，广泛存在于各种真核细胞 表达体系，如pET 系列、pTYB 及pGEX 等融合表 中，参与调节细胞凋亡、信号转导、RNA 转录、 [3] 达载体。pET 系列载体虽然应用较广泛，但对有些 蛋白的核质运输以及细胞周期等多种生理进程 。 蛋白表达效果不是很好。而一些融合蛋白表达系 近年来，发现SUMO 可以作为重组蛋白表达的融 统蛋白表达量虽然很高，但多数表达的目的蛋白 合标签和分子伴侣，具有抗蛋白酶水解、显著增加 可溶性较差。这就要求人们去寻找更多的高效稳 重组蛋白表达量以及促进靶蛋白正确折叠、提高可 [4] 定、可溶性较好的表达系统以满足不同类型基因 溶性等功能 ，且经过SUMO 蛋白酶切割后不残留 的表达。 氨基酸残基。小分子泛素样修饰蛋白（SUMO）和泛 在表达鼠源FGF-21、人源FGF-21 及人源IL- 素（Ub）在一级结构上只有18％ 的同源性，然而， [5] 1β 的过程中发现