嗜冷性海洋微生物产蛋白酶的研究.pdfVIP

维普资讯 微 生 物 学 通 报 嗜冷性海洋微生物产蛋 白酶的研究 邱秀宝 李 彤 戴 宏 袁 影 r中国科学院微生物研究所，北京) 摘要 从 210株海洋细菌中筛选出3o株产蛋白酶活力较高的菌株。以N。为出发菌 ，用 uV诱变 处理，获得突变株。其中的N一 菌株最适生长温度为 20℃：在 2l℃下培养 ¨小时，产酶最高。酶反 应最适温度为 50℃，最适 pH8．0。30℃ 以下酶话稳定。 关键词 嗜 温；海洋细菌；蛋 白酶 从海水等样品中分离产 蛋 白酶 的 细 菌 ， 2．培养基：液体培养基 2216 ：斜面培养 l972年国外就有报道 ，已将海洋细 菌产生的蛋 基 22l6加 2％琼脂 白酶分离纯化井进行了酶性质研究” 】。 最近 结 果 日本学者从海洋 中分离出一株产蛋 白酶 细 菌 ， 且 已付诸生产应用。国内至今 尚未见到此类报 (--)菌种的筛选及育种 道 。作者于 l986年在青岛、厦 门的海水 、海泥 、 1．初筛：将菌种接入 22l6培养基 ，20~(3摇 海鱼等样品中分离 出210株产蛋 白酶 的细 菌 ， 床培养 52小时。 将酪蛋 白平板分别调至 pH7 并对这些菌进行了产酶能力复筛。再经紫外线 和 pH9，用水解酪蛋 白平板的方法分别放置在 诱 变 ，筛选到一株酶活性较高的菌株 N1一。对 此 菌株进行了发酵条件及酶学性质的研究。 材 料 与 方 法 (一)材料 取 自青 岛、厦门海域的海水 、海泥 、海鱼等。 善 (=)方法 巷 口 1．蛋 白酶活性的测定 g 雌 (1)lml酶液加 lmi2％的酪蛋 白，分别在 落 两种温度 (20~c、40oc)水浴中反应 l0分钟，加 2ml0．4mol／L的三氯 乙酸终止反应。以死酶样 品为对照。过滤后用 Folin比色法 铡定酪蛋 白水解物。取 Ira[清液 ，加入 5mi0．4mol／L 的 碳酸钠和稀释三倍 的 Folin试剂 ，40(3水浴保 温 l0分钟 ，波长 680nm下比色，测 OD值 。 温 度(C) (2)水解酪蛋白平板法：用蒸馏水配制酪 ·一 · O-- O 长 蛋白平板(1瞄干酪素+2％琼脂)。将直径6mm 的滤纸片蘸取 005rni发酵液贴于平板 上 培 养 图 1 温度对 N ，菌生长及产酶 的影响 48小时，倒入 l0，刍三氯乙酸溶液 ，比较水解圈 厦门第三海洋所傀纯浩、林燕顺等屙志 助采 集 海 洋落 直径大小。 并提供 部分菌种，特此盛谢 维普资讯 微 生 物 学 通 报 20~C和40~C培养箱中培养48小时，比较不同 3紫外线诱变育种：诱变 出发菌株N，。采 温度下 中性及碱性蛋 白酶 的活性 (其 中4D~C测 用紫外线常规诱变方法。诱变后 的筛选方法同 定的样品稀释 3倍)。