利用双色荧光观察分析重组家蚕杆状病毒对昆虫细胞及蚕体组织的感染.pdfVIP

634 蚕 业 科 学 CANYE KEXUE 2009；35(3) 利用双色荧光观察分析重组家蚕杆状病毒 对 昆虫细胞及蚕体组织的感染 王文兵 马双双 李 兵 叶思思 高 静 沈卫德 (江苏大学生命科学研究院，江苏镇江 212013； 苏州大学生命科学学院，江苏苏州 215123； 江苏大学药学院，江苏镇江 212013) 摘 要 尝试将红色荧光蛋白(RFP)作为昆虫表达体系的分子标签，克隆了 基因的读码框，通过 Bac—to—Bac杆 状病毒表达系统，将该基因插入家蚕核型多角体病毒(BmNPV)中，获得重组杆状病毒BmNPV一 。对家蚕细胞的 感染表明， 适于在昆虫细胞中表达，在显微镜下红色荧光很明显，说明RFP可以作为杆状病毒表达的分子标签。 BmNPV一却 和另一种插入绿色荧光蛋白基因 的家蚕重组杆状病毒 BmNPV—gfp混合感染家蚕细胞和幼虫的实验 表明，二者的荧光很少在同一细胞中发生重叠，说明昆虫细胞大多只感受 1次同一来源的病毒。BmNPV—rfp、BmN— PV—gfp与AcNPV混合感染Sf21细胞的结果也证明了该推断，并且还显示AcNPV可以协助 BmNPV来源的病毒基 因在Sf2l细胞中表达以及协助病毒增殖或产生杂交病毒，但尚未明确其机制。 关键词 红色荧光蛋白；绿色荧光蛋白；家蚕核型多角体病毒；苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒；细胞感染；组织感染 中图分类号 $884．5；$881．2 文献标识码 A 文章编号 0257—4799(2009)03—0634—04 InfectionAnalysisofRecombinantBombyx mori Nucleop0lyhedr0VirustoInsectCellsandBombyxmori TissuesbyObservationofRed andGreen Fluorescence WANG Wen～Bing MA Shuang—Shuang’ LIBing YESi—Si。 GAO Jing。 SHENWei—De ( InstituteofLifeScience，JiangsuUniversity，ZhenjiangJiangsu212013，China； SchoolofLifeSciences，Soochow University，SuzhouJ~ngsu215123，China； 。SchoolofPharmacy，JiangsuUniversity，ZhenjiangJ~ngsu212013，China) Abstract InorderlOknowwhethertheredfluorescentprotein (RFP)couldbeusedasamolecularmarkerinbac— ulovirusexpressionsystem ，theopenreading frameofrfp genewasclonedand inserted intoBombyxmorinucle— opolyhedrovirus(BmNPV)genomeTherecombinantvirusBmNPV—rfpwasobtained．TheresultsofinfectioninBmN cellsdemonstratedthattherfpgenewashighlyexpressedandwassuitableforapplicationasafusingmarkerWhen themixedvirusesofBmNPV—rfpandBmNPV—gfP infectedBmN cellsandBombyxmorilarvae separatedfluorescenl