环境生物新技术在土壤微生态的研究中的应用.pdf

维普资讯 2005年 5月 农 机 化 研 究 第 3期 环境生物新技术在土壤微生态研究中的应用 梁新强，田光 明，李 华 ，刘 和 ，朱 松 ，陈英旭 (浙江大学 环境 f：程系，杭州 310029) 摘 要 ：鉴于传统的微生物分离培养技术已不能满足环境微牛物研究的需要。为此，在介绍变性梯度凝胶 电泳 (DGGE)以及荧光原位杂交 (FIsH)等分子牛物学新技术的基础 卜，对这些技术在土壤微生态研究中 存在的问题和发展前景做 了展望；提 出将这些技术整合也用到复杂土壤的环境微生态研究中，以了解微生 物的时空分布、利-群结构及其 lj功能之间的关系。 关键词 ：环境 1程学 ；环境生物技术 ；虚用；土壤微生态 ；DGGE；FISH 中图分类号：X172 文献标识码 ：A 文章编号 ：1OO3— 188X(2005)03--0212一O4 目前 ，人们对土壤微生念系统中酶 (如磷酸盐 1 引言 还原酶 、硝酸盐还原酶等 )的种类和功能的研究较 土壤作为一个微生态系统 ，蕴藏着巨大的微生 多，但是酶的调控影响囚素很多，限制 了进一步深 物资源 。囚此 ，了解和检测土壤 中微生物的时空分 入研究。信使 RNA(mRNA)与 PCR特异性扩增技术 布 、种群结构 、多样性以及微生念演替 ，对于阐明 相结合的应用效果 比酶测定的方法更好些 ，但是 物质元素在土壤中的微生物转化和迁移规律以及土 mRNA半衰期短，目前的技术手段还远不能达到大范 壤功能型微生物种群的调控 ，具有十分重要的意义。 同推广应用的程度 。而利用 rRNA序列片段 (特别 然而 ，在 目前的技术条件下 ，传统的平板分离 是细菌中 16SrRNA)的一些特性来检测鉴定微生物 或富集等微生物培养技术本身存在着缺陷。对原始 的方法更加成熟 ，其在生物技术中也是一项较成熟 样品不同的稀释程度 、不同的培养物配 比不能反映 的技术。 实际土壤微生态系统的微环境 ，导致多数环境微生 16SrRNA序列片段中存在着若干高保守区和高 物并不能够被分离 出来。许多学者认为 ，传统的微 可变区碱基序列 ，这些序列可用来作为区分分子生 生物培养技术 (如纯培养分离 、生理生化测试 、显 物系统进化的遗传标记。微生物 16SrRNA之间的 微镜计数、最大菌落计数等 )所能获得的微生物不 高保守区序列相对 比较保守 、变化很微小，可以确 足实际土壤微生物种群数量的 1％ 。这些缺陷显 保遗传的稳定性 ，而高可变区序列可 以作为生物多 然会影响微生物的实际检测水平 ，也就不能准确地 样性变异的研究基础。目前 ，GenBank中 16SrRNA 反映土壤系统中微生物种群 、结构以及微生物生态 序列的信息已经有 3000种以上 ，而凡每天还以极 的演替等生态关系。 快的速度增加 ，囚此基于网上基囚数据库中海量的 目前，分子生物学技术的发展 同新月异 ，在分 16SrRNA序列信息进行检索分析 ，以及对未知微生 子水平上阐明土壤微生态系统 中的微生物生态演替 物的 16SrRNA序列进行测序和分析 ，已经成为环 已成为可能 。因此 ，本文提出运用分子生物学新技 境微生物研究的新型手段 ，并有在土壤微生物检测 术手段 ，建立一整套能完整反映微生物生态系统组 中应用的先