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第七章 细胞破碎和生化分离技术 细胞分离方法 重力沉降 离心 过滤 过滤 过滤就是利用多孔性介质截留固液悬浮物中的固体颗粒，从而实现固液分离的方法。 深层过滤 滤饼过滤 滤饼阻力主要由菌种和发酵条件决定 改善过滤性能的方法 过滤操作的两个目标：加快过滤速率、提高过滤质量。 絮凝 助滤剂 反应剂 酶解 过滤设备及选择 依据推动力； 常压过滤机、加压过滤机、真空过滤机 依据设备构造： 板框压滤机、鼓式真空过滤机、加压叶滤机 微滤 微滤是一种以多孔细小薄膜为过滤介质，以压差为推动力，使不溶物质浓缩过滤的操作。 微滤分离过程的三阶段。 影响分离速率的因素主要有操作形式、流速、压力和料液浓度。 微滤技术有着广泛应用和众多的优点。 微滤的操作模式 无流动操作模式和错流过滤操作模式 微滤设备 板框式膜过滤器 管式膜过滤器 中空纤维式膜分离器 螺旋卷式膜分离器 离心的原理 对于浓度较小，粒径较大，硬度较强的不溶物，可以采用过滤分离。 但当固体颗粒细小而难以过滤时，发酵液不易被过滤纯化，离心操作往显得十分有效。 离心分离：是借助于离心机旋转所产生的离心力，使不同大小、不同密度的物质分离的技术过程。 细胞破碎技术 细胞破碎的目的：使细胞壁和细胞膜受到不同程度的破坏（增大通透性）或破碎，释放其中的目标产物。 高压匀浆法 破碎原理：利用高压使悬浮液通过针形阀，从阀座与阀之间的环隙高速喷出后撞击到碰撞环上，细胞在受到高速撞击后，急剧释放到低压环境 破碎作用力：突然减压和高速冲撞 超声波破碎 机械破碎法总结 以上几种机械破碎法的作用机理不尽相同，有各自的适用范围（包括菌体细胞、细胞发酵液的特性）和处理规模（实验室或工业用） 细胞物理破碎方法 1）渗透压冲击法（osmotic shock） 最为温和的一类细胞破碎方法，适用于易于破碎的细胞，eg.动物细胞和革兰氏阴性菌。 细胞于高渗介质中，脱水达到平衡后，迅速将其转置于低渗透压的水或缓冲液中，水进入细胞使胞壁和胞膜破裂 化学法破碎 用某些化学试剂溶解细胞壁或抽提细胞中某些组分 酸碱、某些表面活性剂及脂溶性有机溶剂都可改变细胞壁或膜的通透性，从而使内含物有选择性地渗透出来→化学渗透法 生物法破碎 原理：利用溶解细胞壁的酶处理菌体细胞，使细胞壁受到部分或完全破坏后再利用渗透压冲击等方法破坏细胞膜，进一步增大胞内产物的通透性 生物法破碎 自溶：通过调节温度、pH或添加有机溶剂等激活剂，诱使细胞产生溶解自身酶的方法 超临界细胞破碎技术 破碎方法的选择 选择的一般原则 A、提取产物在细胞质内，用机械法破碎 B、提取产物在细胞膜附近，用化学法 C、提取产物与细胞膜或细胞壁结合，可采用化学法和机械法结合的方法 胞内产物的选择性释放 细胞破碎和双水相萃取技术结合 利用噬菌体裂解细胞 电脉冲提取法 分步、分级提取法 双水相分离技术 双水相萃取可以同时完成细胞碎片去除和产品纯化任务。 双水相萃取技术设备简单、容易放大，但需要较多的原料。 膨胀床吸附技术 通过改进吸附剂本身的物理性质和通过对色谱柱进行精心设计，得到了稳定、无返混的流化床，让固体颗粒通过填料层，同时以填充床的模式吸附目标产物。 优点：减少操作步骤、提高产品收率、降低纯化费用和资本投入。 层析柱对形成稳定的膨胀床有很大影响，其底部和上部分别有一个液体分布器和床层调节器。 选择合适的吸附剂对产物吸附和维持合适膨胀度十分重要，选择时应注意： 1、吸附剂应具有良好的吸附性能和流态化性能。 2、在粒度和密度上要有差异。 膨胀床的操作 五个步骤： 膨胀床的特点 膨胀床的轴向分散程度很小，流体近似于平推流状态。 床层膨胀率和液体混合程度是主要参数，流体流速、物性和温度可以影响床层膨胀率。 吸附性能是研究关注的焦点，床层高度、流速、流体粘度和温度等是影响膨胀床吸附性能的主要因素。 体系中吸附剂与细胞、细胞碎片等组分可能存在相互作用。 膨胀床的应用 泡沫分离技术 利用物质在气泡表面上吸附性质的差异进行分离的技术，依据的是表面吸附原理。 泡沫分离是以泡沫作为分离介质,以组分之间的表面活性差异作为分离依据,利用气体在溶液中的鼓泡来达到浓集物质的一种新型分离技术。 泡沫是气体分散在液体中的多相非均匀体。 液体中泡沫的形成有两种方法: 第一种是将气体通过连续相－液体时采用搅拌或通过细孔鼓泡的方法被分散而形成泡沫, 第二方法是先将气体以分子或离子的形式溶解于液体中,然后设法使这些溶解的气体从液体中析出而形成大量的泡沫。 用气体向水鼓泡时,能产生很多泡沫,但这此泡沫处于一种不稳定状态,会很快消失,当水中存在有表面活性剂时,形成的泡沫就比较稳定。 气体分散在溶液内部形成被液体包裹住的气泡,表面活性剂在气泡表面作定向排列: 吸附效率方程 式中，? :表示