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第九章 酶反应动力学 王顺昌 酶促反应速度受各种因素影响：底物浓度、酶浓度、温度、pH值、激活剂、抑制剂等。 酶促反应动力学是研究酶促反应的速度以及影响酶反应速度的各种因素的科学。 The study of enzyme kinetics addresses the biological roles of enzymatic catalysts and how they accomplish their remarkable feats. 意义？ 元素衰变，分子重排，异构体互变是单分子反应，符合：v=dc/dt=kc,其中c为mol/l,k是比例常数，谓之反应速率常数。单位：s-1 双分子反应很多，符合v=dc/dt=kc1c2, c1,c2分别代表两种反应物的浓度。即与A、B成正比 三、反应级数：根据整个化学反应的速率服从哪种分子反应速率方程式，则这个反应即为几级反应。 如果反应速率能用单分子反应的速率方程式表示，该反应即为一级反应；反应速率与反应物浓度无关的反应谓之零级反应。 凡是反应速率能用双分子速率方程描述，则为二级反应。 但还需要区别对待，如蔗糖水解： 蔗糖 + H2O 葡萄糖 + 果糖，由于稀溶液水比蔗糖多的多，故可以视为一级反应。故反应速率只决定于蔗糖浓度：v=kcsucrose。 四、各级反应的特征: 一级反应：反应速率只与反应物浓度一次方成正比的反应。 t 1/2为一般反应物转变为产物所需要的时间，谓之半衰期 一级反应半衰期与初始浓度无关，与速率常数成反比。 二级反应：反应物浓度二次方或两个反应物浓度乘积成正比的反应。最常见的反应。 二级反应半衰期与初始浓度成反比，即初始浓度越大则半衰期越短，这是二级反应的重要特征。 零级反应速率与初始浓度无关，半衰期与初始浓度成正比，即初始浓度越高，则半衰期越长。 第二节 底物浓度对反应速率的影响 一、中间复合物学说 Henri 1903年蔗糖酶水解实验：酶浓度不变，改变底物浓度，开始为一级反应，中间为混合级反应，最后，底物浓度无论如何增加，反应速率不 再增加，为零级反应。 表明酶可以被饱和，形成 中间产物： S + E ES P + E 。 证据：?EM和X-ray diffraction observation，如DNA polymerase I；?荧光光谱的变化p356；?物理性质如溶解度在形成复合物后产生变化；?分离得到胰凝乳蛋白酶和底物复合物的结晶；?透析和超速离心证据 二、酶促反应动力学方程式 1913年，德国化学家Michaelis和Menten根据中间产物学说对酶促反应的动力学进行研究， 推导出了表示整个反应中底物 浓度和反应速度关系的著名公 式，称为米氏方程。 当反应速度等于最大速度一半时,即 V = 1/2 Vmax, Km = [S] 上式表示,米氏常 数是反应速度为 最大值的一半时 的底物浓度。单位是mol/L 2. 动力学参数的意义 ?米氏常数的意义： 1）它是酶的一个重要的特征物理常数，其大小与酶的性质有关而与酶浓度无关。Km值只是在固定的底物，一定的温度和pH条件下，一定的缓冲体系中测定的，不同条件下具有不同的Km值。不同的酶具有不同Km值，它是酶的一个重要的特征物理常数。 2)Km可以判断酶的专一性和天然底物。一个酶有几个底物，就由几个Km，其中Km最小的底物为其最适底物，即天然底物。 3）根据Km=(k2 + k3)/k1,若k3k2时，Km=Ks，则ES分解即为反应的限速步骤，此时，Km值表示酶与底物之间的亲和程度：成反比关系，Km值大表示亲和程度小，酶的催化活性低; Km值小表示亲和程度大,酶的催化活性高。 4）如果已知Km，可以计算某一底物浓度下，反应速率相当于Vmax的百分率，生产上，底物浓度太小，不经济，太大浪费底物。当v=Vmax时，反应速率与[E0]成正比，如果某一酶Km已知，则任何底物下，酶被底物饱和百分数为： fES=v/Vmax=[S]/(Km+[S]) 5)根据Km大小，可以判断某一代谢途径的方向和途径。GDH之NAD+ Km=2.5x10-5；NADH为1.8x10-5对于一系列反应来说，Km大小可以判断反应的限速步骤。 6)可用于判断反应级数：当[S]0.01Km时，反应为一级反应； 当[S]100Km时，ν=Vmax，反应为零级反应； 当0.01Km[S]100Km时，为混合级反应。 ?Vmax的意义：同一种酶，但底物不同，则Vmax也不同，并且受pH，温度，离子强度的影响。 当S很大时，Vmax=k3[E]，此时，酶被底物饱和，k3表示酶被底物饱和时，每个酶分子转换底物的分子数，又谓之转换数（TN），又常