2013人教版选修一课题2《多聚酶链式反应扩增DNA片段》课件ppt.pptVIP

课题2 多聚酶链式反应扩增DNA片段 DNA复制方向示意图 DNA变性和复性示意图 Taq DNA聚合酶的应用 DNA聚合酶的特性，只能从DNA的3′端开始延伸DNA链、而不能从头合成DNA 高温导致DNA聚合酶失活 课题2“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”Taq细菌的发现过程 PCR的反应过程 一般采用变性-复性-延伸三步循环。 ⑴变性：将模板DNA或延伸后的双链DNA加热到95℃，使双螺旋DNA解开成为单链。 ⑵复性：通过降低反应温度至55℃，使两种引物能与两条解开的DNA互补链的3`端粘合。 ⑶延伸：将反应温度提高到约72℃，在耐热DNA聚合酶的催化下，合成两条互补链，从而使模板DNA扩增一倍。按照上述步骤重复操作约30次，即可将模板DNA扩增数百万倍。 三、实验步骤： 注意事项：详见操作提示 * * * PCR技术简史 1971年，Khorana提出：经过DNA变性，与合适引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可克隆基因。 但由于测序和引物合成的困难，以及70年代基因工程技术的发明使克隆基因成为可能，所以，Khorana的设想被人们遗忘了…… 1985年，美国PE-Cetus公司的Mullis等人发明了聚合酶链反应（PCR） 基本原理是在试管中模拟细胞内的DNA复制 最初采用E-coli DNA聚合酶进行PCR，由于该酶不耐热，使这一过程耗时