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微生物学实验目录 实验一：光学显微镜的构造和使用方法 实验二: 细菌的革兰氏染色 实验三：酵母水浸片的制备－细胞数及死亡率的测定 实验四：显微镜测微技术 实验五：霉菌形态观察 实验六：培养基的制备与灭菌 实验七：微生物的分离与筛选 实验八：淀粉酶产生菌的检出 实验九：大肠杆菌的主要生化特性 实验十：理化因素对微生物的影响 ---紫外线的杀菌作用 实验十一：食品中杂菌总数及大肠菌群的检验 四、思考题 如何根据观察对象使用镜头？ 为什么先用低倍镜观察 一 目的和要求： 1、掌握革兰氏染色的原理及方法 2、初步掌握无菌操作技术 二、实验用品 菌种：大肠杆菌斜面菌种； 八叠球菌斜面菌种 试剂：结晶紫染液；蕃红染液； 碘液；95％乙醇 其它：显微镜；载玻片；接种环； 香柏油；酒精灯；擦镜纸 三、 基本原理： 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家Christain Gran 创立的。 细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。 革兰氏阳性菌的细胞壁主要由肽聚糖形成的网状结构组成，壁厚、类脂质含量低。 革兰氏阴性菌其细胞壁肽聚糖层较薄、类脂质含量高。 四、实验步骤 1、涂片：将大肠杆菌和八叠球菌 分别涂片、干燥、固定 2、染色： 　（1）初染：加草酸铵结晶紫一滴，约一分钟，水洗 　（2）媒染：滴加碘液冲去残水，并覆盖一分钟，水洗 　（3）脱色：将水甩净，并衬以白背景，用95%乙醇滴洗至刚刚无紫色为止，约20—30秒，立即用水冲净乙醇 　（4）复染：用番红液染1--2分钟，水洗 3、镜检：干燥后，油镜观察。以分散开的细菌颜色为准，革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。 4、混合制片观察：一载玻片上两种菌混合制片，对比观察。 五、实验报告 1、结果：画出2株细菌的染色观察结果（颜色、革兰氏染色反应）。 2、思考题： 1）作革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚？其染色成败的关键步骤是什么？ 2）当你对一株未知菌进行革兰氏染色时，怎样能确证你的染色技术操作正确，结果可靠？ 一、实验目的 学习用血球计数板计酵母细胞数。 学习测定酵母细胞死亡率。 死亡率测定的原理为：　　 　　美兰溶液是对细胞无毒性的、弱氧化性的染液，其氧化态无色，还原态兰紫色。 　　活细胞具有还原能力，能将美兰溶液还原为无色，而死细胞不具还原能力。　 四 、操作步骤 １.细胞数测定 稀释：将酵母菌悬液进行适当稀释，菌液不浓，可不必稀释。 镜检计数室：在计数前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则进行清洗。 加样品：盖上盖玻片，用毛细管将菌液由盖玻片边缘滴一小滴，让其自行渗进计数室。不可有气泡。 　4 显微镜计数：先低倍镜找计数室，后高倍镜计数。一般以每小格5—10个菌体为宜。常选四角和中央五个中格计数。格线上菌体只数上线和左边线。芽大于母体一半方计。同法计另一室。 　5 清洗血球计数板：自来水冲洗，切勿用硬物洗刷，自行凉干。镜检，洗净为止。 　６记录 ２.死亡率测定 制片 记录总数及死亡数 计算死亡率 　　死亡率（％）＝　 　　　× １００％　　　 五．实验报告 1. 实验结果： 2 思考题： （１）用血球计数板的误差主要来自哪些方面？如何减少误差？ （２）为什么活细胞能使美兰脱色? 一、实验目的 1）学习用测微尺测量微生物细胞大小。 2）掌握台镜测微尺和目镜测微尺的使用方法。 二、材料与仪器 1、啤酒酵母 2、显微镜、物镜测微尺、目镜测微尺 三、基本原理 微生物细胞大小，是其形态特征重要标志之一。每一种微生物在一定条件下，有其相对固有的大小形态。它是分类鉴定的依据之一。其大小测定可用测微尺测量。测微尺分为目镜测微尺和物镜测微尺两部分。 目镜测微尺：是一块可以放入接目镜内的特定圆形玻璃片。玻片中央是一个细长带刻度的尺，等分成50或100小格，每个等分线间距为0.1mm。由于不同显微镜的放大倍数不同，故目镜测微尺每格实际代表长度随显微镜的不同而不同。因此在使用前必须用物镜测微尺校正，以求得在一定接物镜及目镜等光学系统下，目镜测微尺每格所代表的实际长度。 物镜测微尺是一块中央部分刻有精确等分线的载玻片。每一刻度间距为10um即把1mm等分为100格，是专门为校正目镜测微尺实际数值用的。 四、方法与步骤 1、目镜测微尺的校正 1）将目镜测微尺装入目境内，刻度朝下，并将物镜测微尺朝上置载物台上。 2）用低倍镜核对，至能清晰看到物镜测微尺。 3）改用高倍镜或油镜对焦后，转动目镜，使目镜测微的刻度和物镜测微尺刻度平行。 4)两尺吻合后，先使两尺的一端