分子遗传学4.ppt

第五章 转录（transcription） 转录：是指以DNA为模板，在依赖于DNA的RNA 聚合酶的催化下，以四种rNTP（ATP、CTP、GTP 和UTP）为原料合成RNA的过程。 转录需要模板DNA； 转录需要酶（RNA聚合酶及转录有关的蛋白因子）； 转录过程包括：起始发动、延伸和终止； 转录有特定的调控机制； 转录后的产物需要后续加工； 原核生物和真核生物的转录有一定差异。 一、RNA合成的基本特点 1960年Weiss,S,B等发现RNA聚合酶（RNA Pol）。 其特点是： （1）以核糖核苷三磷酸（rNTR）为底物； （2）以DNA为模板； （3）按5′-3′方向合成； （4）无需引物的存在能单独起始链的合成； （5）第一个引入的rNTP是以三磷酸形式存在； （6）在体内DNA双链中仅一条链作为模板； （7）RNA的序列和模板是互补的。 二、有义链和无义链 1963 J.Marmur和Doty Spiegelnan区分有义链， 采用枯草杆菌的SP8噬菌体为材料； SP8 DNA 双链有“ 轻”、“ 重”，差异明显； 现在将作为转录模板的DNA单链称为模板链或 反义链（antisen strand）； 非模板链称为有义链（sense strand）或编码链； 在体外DNA的两条链都可作为RNA合成的模板。 三、RNA合成和DNA复制的区别 （1）转录时只有一条DNA链为模板，而复制时两条链 都可作为模板； （2）转录时形成的DNA-RNA杂合双链不稳定，RNA 合成后释放；而DNA复制叉形成后一直打开，新 链和模板链形成聚合双链； （3）RNA合成不需引物，而DNA复制需引物； （4）转录的底物是rNTP，复制的底物是dNTP； （5）两者使用的聚合酶系不同。 第一节 原核生物的转录 一．大肠杆菌的RNA聚合酶 大肠杆菌RNA聚合酶由多亚基组成； α2ββ ′σ称为全酶，分子量为480kDa； α亚基与全酶结合疏松，可解离，解离后 的部分称为核心酶。 RNA pol 和DNA pol有两点不同： （1）RNA pol 没有任何校对功能； （2）在不需要引物的前提下能起始合成新的RNA链。 RNA pol 执行的功能 识别DNA双链上的启动子（promoter）； 使DNA变性，在启动子处解旋成单链； 通过阅读启动子序列，RNA pol确定它 自己的转录方向和模板链； 最后当它达到终止子时，通过识别终止 序列停止转录。 二、转录的起始与延伸 (一) 启动子的结构和功能 启动子（promoter）：是指DNA分子上被RNA聚合酶识别并结合形成起始转录复合物的区域，它还包括一些调节蛋白质因子的结合位点。 启动子是控制转录起始的序列，并决定某一基因的表达强度； 与RNA聚合酶亲和力高的启动子，其转录起始频率和效率均高； 启动子的DNA序列有其独特的特点，原核生物和真核生物的启动子序列结构上有一定差异。 启动子序列的结构特点： (1)结构典型,都含识别（R),结合（B)和起始（I）位点; (2)序列保守; (3)位置和距离都比较恒定； (4)直接和多聚酶相结合； (6)位于基因的上游； (7)决定转录的启动和方向； (8)常和邻近基因共同组成操纵子（operon） 典型启动子的结构 －10序列 －10序列是由Pribnow和Schaller（1975）发现，故称为Pribnow框盒（Pribnow box），它位于转录起点上游约－10 bp处，是RNA pol的结合部位 。 保守序列为T80A95T45A60A50T9 ; 位于-10bp左右，AT较丰富，易于解链。其 功能是： (1) RNA pol紧密结合位点; (2) 在此形成开放启动复合体； (3) 使RNA pol定向转录。 -35序列 －35序列又称为Sextama盒（Sextama box）， 位于－35 bp处，是RNA pol的识别部位。 其保守序列为（T82T84G78A65C54A45）； 其功能是: （1）为RNA pol的识别位点。σ亚基识别 －35序列，为转录选择模板； （2）－35和－10序列的距离是稳定的，此 与RNA pol的结构有关。 转录起始位点（I） 转录开始时模板上的第一个碱基 为转录起始位点； 在原核生物中90%以上为A或G； 位置固定，常见序列是CAT。 （二）转录的起始 1. 全酶与模板的DNA接触，生成