肺癌肿瘤药敏和耐药基因表达的相关性研究.pdfVIP

肺癌肿瘤药敏与耐药基因 表达的相关性研究 韩宝惠廖美琳苏建中王恩忠冯久贤 上海胸科医院 肺癌发病率及死亡率在近10年来呈明显上升趋势，已成为严重威胁人民健康的恶性肿 瘤之一，近60％～80％的肺癌患者在诊断时已属晚期，治疗多采用以化疗为主的多学科治 疗；而目前化疗方案的确定多依赖于临床经验作为选择药物的手段，难以对具有肺癌耐药的 患者作出有针对性的选择，成为临床目前所难以克服的问题之一。近年来尽管各种药敏检测 方法对预测肿瘤细胞耐药及敏感性起到了一定的辅助作用，但多数检测方法在临床实践中存 在各种各样的缺陷，限制了临床应用。由于近年来分子生物学检测的普遍应用，不少学者对 耐药基因在肺癌耐药中的作用进行了深入的研究¨，2j，但耐药基因与肿瘤药物敏感试验之间 关系方面的研究却十分少见。本文为深入了解肿瘤药物敏感检测与肺癌耐药基因表达之间的 关系，对48例非小细胞肺癌肿瘤标本进行了肿瘤药物敏感试验，同时对同一标本检测了肿 瘤耐药MDR—I、GST一Ⅱ、MRP基因的表达。以希明确耐药基因表达与肿瘤药物敏感之间 是否具有相关性及临床指导意义。 一、材料与方法 1．研究对象 病例选择：本院自1999年2月至1999年8月经组织学证实为肺癌的住院病人。手术切 除标本送实验室行肿瘤药物敏感检测，同一新鲜手术标本抽提肿瘤组织RNA(RT—PCR方 法)检测MDR—I、GST一Ⅱ、MRP基因的表达。 2．病例选择标准 所有病例均有组织学诊断，组织学标本行常规病理检查。主要脏器功能障碍能够难受手 括胸部正、侧位x片，纤维支气管镜检查，胸部、腹部、头颅CT，骨ECT扫描。 3．耐药基因检测 mm Tits，1 (1)手术标本或活检标本30mE加DNA提取液(10 10 10 ml，蛋白酶Kml(20 200”l，10％SDS m∥m1)消化水浴500C，2小时。 (2)RNA样品处理试剂盒(华美生物公司)分离提取膜板RNA。 1—5 mM 1ml，RNASIA (3)制备eDNA反应液，总RNA pg，5Xbuffer2山，10 Dntp U／m1)0．3 ml。 (40U／m1)0．5m，随机引物0．5 m，加3滴水至lo btl，AMV(9 101 1 cDNA 一Ⅱ、MRP试剂盒(军事医学科学院)。反应液：混合PCR液17ml，2”I plTaq 酶。 1 rain (5)MDR—I、GST一“、扩增参数：94℃3rain，94℃30see，55℃30sec，720C min×35个 ×30个循环。MRP(336 min，940c40sec，．55℃30$eC，720C1 bp)扩增：94℃3 循环。扩增产物保存于4℃冰箱中。 4．药敏检