G4+protein和细胞皮层骨架互作调节细胞形态.pdfVIP

64 i proten与细胞皮层骨架互作调节细胞形态 周平周翔刘榜木 华中农业大学动物科技学院动物分子生物学与育种试验室，农业动物遗传育种与繁殖教育部 重点实验室，武汉430070 关键词：G4 protein；胞膜定位；细胞变圆 引言 哺乳动物MHC．III区域包含着各种不同类型的基因，并与多种疾病存在联系，诸如各种 免疫缺陷性疾病、僵直性脊椎炎、风湿性关节炎以及I型糖尿病等等。由于MHC．1II区域中 所包含的基因类型多样，功能各异，因此要全面认识MHC．1II区域对机体的重要性，需要对 其中的每个基因逐个加以深入的功能研究。其中，C60rf47基因所编码的G4 protein研究很 少，具体功能尚未确定，因而我们对此展开研究。 材料方法 用DNAMAN软件对来自多个哺乳动物物种的G4 protein序列进行比对，分析其序列特 network 1)以及人B49altl 征；将小鼠TGOLNl蛋白(trans—golgiprotein 1)的N端1．81aa序列分别与红色荧光蛋白(hcRed)融合 (Beta-1，4一galactosyltransferase 以指示高尔基体，分析G4 aa缺失突 protein的高尔基体定位；将G4protein及其N．端1．18 变体分别与绿色荧光蛋白(EGFP)融合以分析其亚细胞分布及细胞形态观察；将膜定位信 号肽(GCIKSKGKDSA)与G4aa缺失突变体融合，以及将G4 protein的N．端1．18 protein 的N．端1．18aa序列与EGFP融合，以便分析G4 protein的N端膜定位信号肽。用荧光标记 的Phalloidin染细胞骨架F．actin，以分析G4 protein与F．actin的共定位。倒置荧光显微镜或 荧光共聚焦显微镜用于细胞形态及蛋白亚细胞定位观察、拍照，所用细胞为仓鼠肾细胞 BHK-21。免疫共沉淀分析G4 protein与细胞骨架蛋白actin的互作。 结果 G4 protein含有三个保守区，分别为N一端保守区、近N．端Ser富含区和近C．端疏水区。 G4 protein与TGOLNl部分共定位，并且G4protein与B49altl部分共定位。过表达G4protein 的细胞具有较高比例的圆形形态，并伴随G4 protein的细胞膜定位，一些细胞中G4protein 未转运至细胞膜上，其细胞形态正常，呈类梭形。N一端1．18aa缺失的G4 protein定位于高 尔基体，细胞形态正常，呈类梭形。将膜定位信号肽(GCIKSKGl①SA)与G4 protein的 N．端1．18aa缺失突变体融合后，外源的信号肽可将G4 N端缺失突变体介导至细胞 protein 膜，并像野生型G4 aa序列与EGFP融 protein一样使细胞变圆。将G4protein的N一端1．18 合，可将EGFP介导至细胞膜，细胞形态正常。荧光标记的鬼笔环肽染细胞骨架F—acti