寡糖及糖肽的分离和检测.pdfVIP

2010年微纳尺度分离和分析技术学术会议暨第六届全国微全分析学术会议 寡糖及糖肽的分离与检测 * 梁鑫淼, 傅青，郭志谋，张秀莉，于龙 liangxm@dicp.ac.cn 中国科学院大连化学物理研究所，116023 糖蛋白中的寡糖在疾病早期诊断、药物新靶点发现等方面所表现出的广阔应 用前景，使得寡糖结构表征成为糖生物学研究的一项重要研究内容。寡糖高效分 离方法对于寡糖结构分析至关重要，同时也是糖生物工程的质量控制得以顺利实 施的重要保障，更是分离科学中的一个难点问题[1]。 近几年，研究者们尝试运用新方法解决寡糖的高效分离问题，如Kuberan 发 展了离子对毛细管液相色谱法[2]，Robinson 发展了石墨化碳柱的高效液相色谱 法[3]、Charlwood采用亲水作用色谱法分离衍生后的寡糖[4]。其中亲水作用液相 色谱（HILIC）作为一种新的分离模式，有望更好地解决寡糖的高效分离问题。 亲水作用液相色谱是上世纪90年代提出的一种用于分离极性化合物的色谱技术 [5]。亲水作用液相色谱和正相色谱最大的不同就是使用含水量大的溶液体系作 为流动相，这就解决了正相色谱中寡糖不溶于流动相的问题。近年来，亲水作用 色谱越来越受到关注和重视。一方面是因为强极性化合物的分离问题引起了各个 研究领域的重视，如药物分析，代谢组学，蛋白质组学等研究领域都不同程度的 涉及到强极性化合物的分离问题；另一方面是因为亲水作用色谱自身具有流动相 组成简单、柱压低、容易与质谱联用等优点[6]。目前亲水作用色谱所使用的分 离材料仍多使用正相色谱的分离材料，如硅胶、键合氨基、键合氰基[6-8]。 这 类分离材料同样存在着重现性差和使用寿命短的问题。近几年来，针对强极性的 小分子药物的亲水分离材料也逐步出现，主要是将含酰胺基、羟基、两性离子等 强极性基团的分子或聚合物键合到硅胶上作为亲水分离材料[6,8]。 我们利用Click Chemistry 方法将麦芽糖键合到固定相上（Click Maltose）， 核苷在ClickMaltose固定相上的保留行为表明Click Maltose表现出典型的HILIC 保留特性。氨基酸和肽在Click Maltose 上的保留行为表明固定相表面带有明显 的正电荷，在提供亲水作用机理的同时能与溶质分子发生静电相互作用（吸引或 排斥）。因此，ClickMaltose 固定相在分离酸性样品时表现为亲水作用/弱阴离子 交换（HILIC/WAX）混合模式色谱，在分离碱性样品时表现为电荷排斥亲水作 用色谱（ERLIC）。 2010年微纳尺度分离和分析技术学术会议暨第六届全国微全分析学术会议 固定相色谱保留值的重复性和稳定性对于其应用推广具有重要影响。以5种 标准样品为对象，对Click Maltose 固定相的重复性和稳定性进行了研究。图1 是ClickMaltose 色谱柱连续进样10次得到的色谱图。10次进样得到的色谱峰几 乎完全重叠，保留时间的标准偏差小于0.16，说明Click Maltose 色谱柱具有很 好的重复性。 0.20 0.20 00..2200 uracil, 0.16 e e ee s s ss n n nn o o oo 0.15 0.15 p 00..1155