猪繁殖和呼吸综合征病毒5’非编码区顺式作用元件的解析.pdfVIP

猪繁殖与呼吸综合征病毒57非编码区顺式作用元件的解析 高飞，韦祖樟，陆嘉琦，袁世山，童光志· (中国农业科学院上海兽医研究所／中国动物卫生与流行病学中心上海分中心猪病防治研究室上海200241) and vi 摘要：猪繁殖与呼吸综合征病毒(PorcinereproductirerespiratorysyndromerLIS，PRRSV)是引起猪繁殖与 呼吸综合征的病原，此病以母猪繁殖障碍和仔猪呼吸系统症状为特征。是世界养猪业的一个巨大的威胁。近年来，此病给各 制、亚基因组mRNA的合成和蛋白翻译、病毒颗粒组装以及病毒致病机理等许多问题目前正待解决。目前，大量研究已经证明， PRRSV基因组的5’非编码区(5’UTR)对病毒复制至关重要，但是目前对其存在的顺式作用元件和调控功能还知之甚少。 UTR5’ 本研究基于实验室构建的II型PRRSV全长感染性克隆，构建了一系列5’ 端缺失突变体以及两型UTR互换的突变 7 5 体，通过RNA／DNA转染、病毒拯救、病毒学分析等，初步解析了的PRRSVUTR一些顺式作用元件的结构与功能，对进一 步剖析病毒致病机理有重要意义。现将研究内容简述如下： 1．猪繁殖与呼吸综合征病毒5’非翻译区存在与病毒感染性相关的顺式调控元件 7 UTR5’ 本研究基于北美型(II型)PRRSV弱毒株感染性克隆pAPRRS的骨架，构建了一系列在5端 缺失的突变全长克隆，通过体外转录的RNA转染和直接DNA转染，病毒拯救及后续病毒学检测，结果显示： 7 PRRSV5 UTR的5’端前3个碱基可以缺失，对病毒的感染性基本无影响；5’ 端前16个碱基的保守性 对病毒非必需，但是拯救的病毒随着碱基缺失的增多，复制的第一轮病毒在MARC一145细胞上的滴度明显降 低，其后随着突变病毒在MARC一145细胞上传代，其复制效率得到一定程度的恢复，但降低的趋势未改变。 UTR进行的二级结构预测分析发现， 缺失突变病毒的5’ 端被一系列AU—rich的序列来修复。后续对5’ 外源序列使得SLl得以修复，综上所述，病毒5’端前16个碱基的保守性对病毒复制是非必须的，其所形 成的SLl对病毒的感染性至关重要。 7 2．5UTR57端序列缺失体外源序列修复分析 为了进一步研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因组57非翻译区的结构与功能，本研究利用上 述5’UTR5’末端缺失的突变体病毒，利用5’RACE技术对突变病毒的57末端进行测序分析。在研究过程 启动子转录起始位点有所不同，我们人为引入一段GC—rich的序列以判断上述修复过程是否为模板依赖性。 7 5 结果证明，病毒的外源序列修复机制是非模板依赖性的。通过二级结构预测分析发现，在PRRSVUTR中 的第一个茎环结构(SLl)是病毒感染性必不可少的。 发挥作用 本研究将欧洲型PRRSV 毒学分析比较发现，在病毒复制、空斑形态、基因组负链复制和亚基因组转录等层面，嵌合病毒与亲本毒 差异不显著。I型5’UTR在功能上可完全替代II型的5’UTR。 4．异源5’非翻译区在猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性拯救过程中的功能解析 ——567--·