双向固体发酵对川芎活血化淤增效作用.pdfVIP

MEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2011VOL．22NO．6 时珍国医国药2011年第22卷第6期LISHIZHEN 双向固体发酵对川芎活血化淤的增效作用 高慧娟1’2’3，余梦瑶2，江南2，魏巍2，王世宽1，罗霞2+ 3．河西学院生命科学与工程系，甘肃张掖734000) 摘要：目的通过双向固体发酵技术研制具有活血化淤作用的灵芎菌质。方法经过川芎平板初筛法和川芎袋料复筛法， 获得能在川芎基质上生长的优势菌株；进一步通过测定小鼠凝血时间和出血时间，以及大分子右旋糖酐所致的血淤模型 中小鼠耳伊文斯蓝的表达量，确定发酵得到的灵芎菌质的活血化淤作用，同时用ABTS法测定了菌株生长时期漆酶的活 性。结果复筛得到三株能够在川芎基质上生长良好的灵芝菌株，其中zL一13灵芎菌质具有较好的活血化淤效果，而且 作用显著优于中药材川芎；此外，菌株的漆酶活性越高，发酵形成的菌质活血化淤效果越好。结论通过双向固体发酵技 术得到的灵芎菌质能显著提高川芎的活血化瘀效果。 关键词：漆酶； 小鼠止血时间；伊文斯蓝 DOI标识：doi：10．3969／i．issn．1008旬805．2011．06．039 中图分类号：R283；11285．5文献标识码：B 文章编号：1008-0805(2011)06—1370旬3 川芎LigusticumChuanxiongHolt．为伞形科植物川芎的干燥 根茎，其性温、味辛，具有活血行气、祛风止痛之功效…，常被广 泛用于各种血瘀证的临床治疗。近年来，如何提高川芎药效已成 速大容量冷冻离心机(上海锐聪科技发展有限公司)。 为人们关注的问题。研究发现，通过生物转化使中药中原有成分 2方法 被修饰或改变，形成具有较高活性的物质，是提高中药药效的一 2．1斜面菌种活化取冷藏的灵芝菌种，按照无菌操作要求转 个有效途径。 d。 接小菌块至斜面培养基中，27％避光培养7 20世纪80年代，庄毅悼1创立了现代中药双向固体发酵技2．2川芎初筛培养基制法将川芎打成40目粉末，用水调至糊 术，该技术是用药用真菌发酵具有活性成分的药性基质，经过药 状，使川芎粉的含量为15％，再加入1％的琼脂，加热使琼脂融 性基质和真菌菌体生长过程中的相互作用，从而产生新的活性成 化，装入三角瓶中在121℃条件下高压灭菌30rain，冷却至80℃ 分和功能物质。在增效、扩用、解毒p1等方面，经发酵后得到的后在无菌条件下倒入90mm平板中备用。 菌质具有比真菌或药性基质本身或两者简单相加更强的功用，因 2．3 灵芝发酵菌株筛选将灵芝菌株活化的菌丝用无菌的打孔 此，双向固体发酵技术成为中药新药研制的新途径。通过灵芝发 器打10mm的菌块，在无菌条件下转接在川I芎琼脂平板中央，置 酵川芎的双向固体发酵技术得到灵芎菌质，以增强川芎活血化瘀 于27℃培养箱中避光培养，将能够在川芎琼脂平板上生长的菌 效果的研究非常必要。然而，此方面研究未见报道。 株作为初筛的促发菌株；而后将初筛菌株的原种接在川芎片袋料 本文首次通过两次筛选获得适宜于在川芎基质上生产的灵 培养基上，观察菌丝生长速度和吃料情况，菌丝生长速度快的菌 芝菌株，采用双向固体发酵技术制得灵芎菌质，对其活血化淤作 株作为复筛的促发菌株。 用进行了研究，并与川芎药效进行对比，旨在为川I芎的利用开辟 灵芝菌株接种到川芎片袋料培养基上后10d开始取样，每 新的有效途径，为菌物药的开发提供新的材料。 隔10d取1次，用于漆酶活性测定和菌质及川芎提取物制备。 1材料与仪器 2．4菌质及川芎提取物的制备将满袋的菌质去袋后充分混匀， 1．1 材料灵芝菌株(灵芝ZL一1～66)由四川省中医药科学院于60℃鼓风干燥。先用3倍体积的乙醇超声提取2次，每次30 中药细胞与分子生物学实验室提供。川芎购自四川都江堰地区， rain；过滤，滤渣用10倍体积的水煎煮2次，每次lh。45。C旋转 Chuanx— 经四川省中