烤烟发酵增香菌株的鉴定与初步应用研究.pdfVIP

烤烟发酵增香菌株的鉴定和初步应用研究 赵铭钦1 邱立友1 齐伟城2张维群2岳雪梅3 国家烟草栽培生理生化研究基地 河南农业大学 北京卷烟厂 北京市烟草专卖局 我国开始烟叶发酵机理的研究较晚，目前还没有很确 切的结论。本试验研究了微生物对烟叶发酵所起的促进作 用。鉴定出了烟叶中增香微生物的种类，并将这类微生物 直接应用于烟叶发酵。试图达到加速烟叶发酵，改善烟叶 品质的目的。 1材料和方法 1．1供试菌株 将从烤烟表面分离得到的优势微生物经初筛、复筛之 后，共筛选出8种10株能够增香的菌株，编号分别是 生物工程学院微生物教研室提供。 1．2增香菌株的分类鉴定 1．2．1个体形态的观察 (1)革兰氏染色用牛肉膏斜面培养基培养的幼龄菌 种进行染色。对某些染色不定的菌株，要重复多次加以判 舱9 断： (2)苏丹黑染色采用10～18小时的幼龄菌种进行 染色。观察细菌体内是否储藏有类脂物质= (3)菌体大小测量利用革兰氏染色涂片进行菌体大 小的显微测量。菌体大小以微米为单位，每个菌株需测量 10个以上的菌体的长与宽，然后求其平均值。 1．2．2群体菌落形态和培养特征的观察 不同种的 细菌在相同成分或状态的培养基上的生长特征各异，因此 可作为鉴定细菌的依据之一。配制牛肉膏蛋白胨培养基， 灭菌后倒平板，待凝固后将幼龄菌种划线接种在平板上培 养24～48小时，观察并记录菌落形态、质地、边缘、光学特 性以及菌落颜色和是否分泌可溶性色素等。 1．2．3生理生化试验 主要参考文献i3]，进行以下 生理生化试验： (1)糖或醇类发酵试验； (2)甲基乙酰甲醇试验(VP反应)； (3)淀粉水解试验； (4)从甘油产生二羟丙酮试验； (5)明胶水解试验； (6)硝酸盐还原试验； (7)产生吲哚试验； (8)石蕊牛奶试验； (9)耐盐性试验； (10)在pH5．7的营养肉 汤上的生长试验； (11)利用柠檬酸盐或丙酸盐的试验? 330 1．3烤烟主要化学成分分析 烤烟化学成分分析主要依据王瑞新等[5]的方法，分别 测定烟叶中还原糖、烟碱和总氮含量。 1．4烟气特性鉴定 将Bs301菌株接种于牛肉膏蛋白胨斜面培养基中大量 X 培养后，刮取菌苔，制成1．0 108个知l的菌悬液，喷洒于 烟叶表面，然后在50℃、相对湿度65％的人工气候箱中发 酵18天。试验设计采用半叶法，以不接菌的另一半叶作对 照。人工发酵结束后，将烟叶用小型切丝机切成0．6～ 0．8mm的烟丝，用手工卷烟器制成单料烟，经24h以上的 时间水分平衡之后，由河南农业大学烟草研究所专家评吸 小组进行烟气特性鉴定。 2结果与分析 2．1增香菌株的形态特征 经初筛、复筛得到的8种lO株增香菌的个体形态特征 观察结果列于表1。 从表1可见，这些菌株在牛肉膏蛋白胨培养基斜面和 平板上，均能形成芽孢，所以都属于芽孢杆菌属，它们的芽 孢呈椭圆形或柱形，没有球形，所以这些菌株属于芽孢杆菌 属的第1群和第2群，没有第3群球形芽孢杆菌。B306菌 株芽孢囊膨大，故属于第2群，其余菌株不膨大，属于第1 群。在第1群中，茵体宽度在0．99m以下的，包括Bs301、 B1110、B301、B130，属于地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、坚 33l 表1增香菌株的形态特征 kksS08Bs301B1110B1105 13602Bsl20B1102 B3叭B912