松杨栅锈菌地理菌群SCAR标记转换.pdfVIP

松杨栅锈菌地理菌群的SCAR 标记转换 1 1 2 1 曹支敏 ，张振 ，曹轩锋 ，余仲东 1.西北农林科技大学林学院,陕西杨凌（712100 ） 2.杨凌职业技术学院，陕西杨陵 (712100) E-mail ：yu-10083@163.com 摘 要：根据RAPD 分析结果，对松杨栅锈菌西部和北方两大地理菌群RAPD 扩增特异DNA 片段进行SCAR 标记转换。经pGEM-T 载体克隆和测序、Sequman 整合后，用Primerselct 分 别 设 计 了 两 地 理 菌 群 的 简 并 引 物 对 （ 西 部 菌 群 简 并 引 物 对 PNW0118-382-F:GAATCGGCCACAAAACTATC,PNW0118-382-R:GAATCGGCCATGACTT GAGC, 北方菌群简并引物对 PNW0118-400-F:GAATCGGCCACAAAACTATC ， PNW0118-400-R:GAATCGGCCATGACTTGAGCTGC ），经PCR 扩增成功获得两大地理菌群 的SCAR 标记，西部菌群SCAR 标记为382bp ，北方菌群的SCAR 标记为400bp 。 关键词：松杨栅锈菌；DNA；SCAR 标记 0 引言 研究松杨栅锈菌的群体遗传结构及其动态，对揭示其毒性的变异和演化规律具有重要意 义。由于缺乏适宜的遗传标记，长期以来，对该菌群体分化的研究几乎完全基于毒性调查和 分析上。各国在不同时期使用的鉴别寄主杨树种类存在较大的差异，相互间的比较有困难。 同时，鉴别过程的繁琐以及环境、人为因素的干扰，在小种鉴别上都会造成困难。利用分子 标记技术，建立小种分子标记体系，已成国内外急需解决的问题。 松杨栅锈菌Melampsora larici-populina Kleb 所致锈病是高山及北方平原地区青杨派、黑 ， ， ， 杨派及其杂交杨树上重大病害[4 11 21 22] 。感病品种及不合理的栽培制度，加剧了该病的危 害[19，20] 。在杨树与落叶松混植的地区，松杨栅锈菌的变异频率和遗传多样性指数较平原杨 树纯林和苗圃高 [18] 。欧美地区报道该菌种内有明显的小种分化，至今已报道E ~E 的 5 个 1 5 ， [19] [2 3] 生理小种 。曹支敏 也相继报道了我国秦岭地区该菌3 个生理小种及我国存在的5 个在 致病性上分化明显的生理小种。杨树上M.medusa 与M. larici-populina 的种间微卫星分子标 记 [24] [18] 、M.medusa f.sp. deltoidae 部分基因型标记已有报道 ，柳树上M. epitea 不同生理专 化型的RFLP 标记也有报道 [23] ，并在种群分化中得到运用。然而，迄今为止，M. larici-populina 种内小种间、遗传型间等特征性分子标记尚未见报道，极大的限制了对该类菌种群结构分化 和流行动态监测的研究。在同类的研究中,小麦条锈菌主要流行小种的 SCAR 标记体系已建 [1 ，7] [15] 立并在生产实践得到运用 。余仲东等 对来自全国的5 个子种11 个菌系作了RAPD 分 析，初步将我国松杨栅锈菌分为2 个地理群，2 个生态型和4 个遗传群。本文根据RAPD 遗 传分析结果，将该菌地理群连锁DNA 片段转换成了共显性的SCAR 标记并进行了验证，为 进一步监测该菌田间流行规律奠定了基础。 1 材料与方法 1.1 供试菌