强心复脉颗粒对兔受损窦房结起搏基因HCN4+mRNA及蛋白表达影响.pdfVIP

中华中医药学会心病分会北京中医药学会心血管病专业委员会 2012·年会论文集 四、心律失常 强心复脉颗粒对兔受损窦房结起搏基因HCN4mRNA及蛋白表达的影响 刘如秀1；王妮娜12；谢朝霞2；李敏1；吴振宇1；暴美静12；李汇博1 1+北京市，中国中医科学院广安门医院(100053) 00029) 2‘北京市，北京中医药大学(1 摘要：目的：探讨强心复脉颗粒对病态窦房结综合征家兔受损窦房结起搏基因超级化激活的环核苷酸 阿托品组、强心复脉颗粒高、中、低剂量组(以下简称高、中、低剂量组)6组，各组5只，正常组不造 模，余五组均采用甲醛加压注射渗透法建立兔病态窦房结综合征模型，并灌胃给药7天。分别采用逆转录 聚合酶链式反应(RT-PCR)与免疫组织化学法检测各组动物实验后窦房结细胞起搏基因HCN4mRNA及通道 蛋白表达水平的变化。结果：与正常组同期相比，造模后各组家兔窦房结组织HCN4mRNA及蛋白表达均有 阿托品组问则无显著性差异(P0．05)。与模型组同期相比，高剂量组家兔窦房结组织HCN4mRNA表达量 显著升高，且明显优于中、低剂量组及阿托品组，差异有统计学意义(PO．05)，中、低剂量组及阿托品 组则与模型组无显著性差异。结论：窦房结功能障碍的基因分子机制与窦房结细胞起搏基因HCN4表达下 高心率，是其治疗病态窦房结综合征的主要分子机制之一。 关键词：强心复脉颗粒；窦房结；起搏基因；HCN4；RT—PCR；免疫组化 窦房结是心脏的最高起搏点，窦房结起搏细胞的重要特征在于其动作电位4相的舒张期自动去极化， 这是其执行起搏功能的关键u1。已有研究表明超级化激活内向阳离子流(If)是参与舒张期自动除极化的 主要成分，因此被称之为起搏电流，其形成的分子基础是编码超级化激活的环核苷酸门控阳离子通道 cation (hyperpolarization—activatedcyclicnucleotide—gated 年来随着细胞电生理学，细胞分子生物学等方面知识的发展与丰富，已有大量研究证实HCN4起搏基因可 以作为靶基因用于窦房结功能障碍的生物起搏器治疗。 强心复脉颗粒是名老中医经验方，临床上治疗病态窦房结综合征效果显著，但其治疗病窦的机制目前 尚不清楚，究竟是否与其增加起搏通道基因表达有关尚待进一步证明。本实验分别采用逆转录聚合酶链式 mRNA及通道蛋白水平的 反应(RT—PCR)与免疫组织化学法检测各组动物实验后窦房结细胞起搏基因HCN4 326 !兰主堕垫堂全：堂堕坌全!!塞!堕垫堂全：堂皇笪堕童些耋星全!!!!：笙全笙壅堡 表达，揭示强心复脉颗粒修复兔受损窦房结结构和功能的基因分子机制。 1．实验材料 1．1实验动物 (京)2005—0009)。 1．2实验仪器 自制窦房结定位注射浸润电极三通管，自制心外膜调搏电极，倒置荧光显微镜(Olympus 荧光定量PCR仪(美国AppliedBiosystems公司)，凝胶图像分析仪ImageMaster Biotech公司)，高速冷冻离心机(德国BACKMAN公司A1lagra．21R 国BACKMAN公司，DU640型)，电泳仪(北京六一仪器厂CYY—III一5型)。 1．3实验药物及试剂 StrandcDNA Kit(Fermentas)；SYBRGreenPCRMaster Trizol(Invitrogen)，RevertAid删FirstSynthesis Mix(ApplledBiosystems)；引物采用primerpremier5．0设计，由赛百盛生物技术公司合成。 2．实验方法 2．1分组与给药 将30大耳白兔随机分为六组：正常组、模型组、阿托品组、强心复脉颗粒高剂量组(高剂量组)、强 心复脉颗粒中剂量组(中剂量组)、强心复脉颗粒低剂量组(低剂量组)，各组5只。正常组不造