祛瘀生新法对AMI后心肌重塑及TGF-β1%2fSmads通路干预的研究.pdfVIP

中华中医药学会心病分会北京中医药学会心血管病专业委员会 2012·年会论文集 祛瘀生新法对AMI后心肌重塑及TGF-B1／Smads通路的干预研究 赵海滨，王帅，张秀静，唐杰，王威，郭梦 北京市，北京中医药大学第三附属医院(100029) 的影响，探讨祛瘀生新法对急性心梗后心肌重塑的效应机制，为祛瘀生新药治疗急性心梗后心肌重塑提供 原含量，并观察心肌组织H—E染色结果。结果：模型组心肌组织TGF—D (P0．05)，Smad7mRNA表达降低。祛瘀生新组能降低心肌组织TGF—B ImRNA、 表达，降低心肌胶原含量，并能减轻心肌组织的病理损伤。祛瘀生新组与AMD3100组相比较TGF—B smad3mRNA表达无明显差异(乃0．05)。结论：祛瘀生新法对急性心梗后心肌重塑有一定抑制作用。 关键词祛瘀生新法；AMI；心肌重塑；TGF一131／Smads 急性心肌梗死(AMI)后的心肌重塑与心脏破裂、室壁瘤形成及心力衰竭等严重并发症密切相关，在AMI 死亡率及预后中起至关重要的作用Ⅲ。AMI后心肌重塑机制复杂，后果严重，疗效不理想，相关研究亟待 深入。根据有关实验表明：TGF-B 居关键地位瞳1。但目前对其活化调控缺乏有效手段。 祛瘀生新法以中医“祛瘀血、生新血”为理论基础，对AMI后心肌重塑疗效肯定，本课题组通过研究 1／Smads通路的影响，探讨祛瘀生新法对 祛瘀生新法在大鼠急性心梗后心肌重塑中的干预作用及对TGF—D 急性心梗后心肌重塑的效应机制，为祛瘀生新药治疗急性心梗后心肌重塑提供实验依据。 1材料与方法 1．1材料 试剂用药血塞通软胶囊由昆明圣火制药有限责任公司提供，总RNA试剂提取盒由康为世纪提供，5×SYEIR Green PCRMasterMix为ABApplled AgilentTechnologiesstratageneM×3000P荧光定量仪。 1．2方法 10 中华中医药学会心病分会北京中医药学会心血管病专业委员会 2012·年会论文_篓 1．2．1动物模型制作 饲养。 准12导联，记录大鼠心电图。经左前胸廓旁第3，4肋间逐层开胸，暴露心脏，分离心包，在肺动脉圆锥 波判断为可能心肌梗死，若无病理性Q波，则再次结扎，以提高心肌梗死模型成功率，然后逐层缝合心腔。 术后常规抗感染治疗。 祛瘀生新组：制备AMI大鼠模型，术后立即灌胃给药，给药量按《药理实验方法学》所示剂量换算法 假手术组：大鼠经历上述手术过程，丝线从冠状动脉下穿过但不结扎。 正常组：不做造模处理。 1．2．2实时荧光定量PCR检测各组心肌组织TGF—D 组织总RNA的提取：心腔内注射10％氯化钾使心脏停跳于舒张期，迅速取下心脏，去除心房大血管及心脏 外结缔组织，冲洗干净，，分别置于液氮中保存。余下左室用4％多聚甲醛固定，石蜡包埋。在冰块上切取 50mg～i00 buffer 计算出PO／A含量。②eDNA的合成：RNA样品取10ug，依次加入5×RT 5H 0(dY)luL， L，01ig NTPl12L，RNAsin1 u u u L，M—MLA反转录酶1L，无RNase水补足至总体积25 min，4C10min。得RT终溶液即为cDNA溶液。③实时定量PCR：每种组织均以TGF一13 基因引物进行定量PCR反应，每管设三个复孔，在96孔PCR板中进行。TGF-B1引物序列：上游引物 GCCGTA一3’，产物143bp。Smad3 上游引物5’～GTcAACAAGTGGTGGcGTGT 上游引物5一GGAGTc