DNA复制修复.pptVIP

第十二章 DNA的复制和修复 遗传信息传递的 中心法则 目 录 第一节 DNA的半保留复制 DNA的半保留复制的概念 DNA的半保留复制实验依据 复制中的大肠杆菌染色体放射自显影图(Caims实验) (DNA)n + dNTP → (DNA)n+1+PPi 模板：两条链都可作为模板 引物：提供游离的3’-OH末端 底物： dNTP DNA复制的相关酶 合成方向5’→3,链从5’向3’延长 二、原核生物DNA聚合反应有关的酶类 连接酶连接切口 （4）DNA解链酶(DNA helicase)每解开一对碱基需水解2分子ATP (5）单链结合蛋白(single-strand binding protein,SSB)：结合在解开的DNA单链上，防止重新形成双螺旋及核酸酶的水解。 (6）拓扑异构酶(topoisomerase):兼具内切酶和连接酶活力，能迅速将DNA超螺旋或双螺旋紧张状态变成松驰状态，便于解链。 拓扑异构酶Ⅰ：在DNA的特定部位将双链中的一条切开，使链的末端沿螺旋轴松解的方向转动，然后将切口封闭，使DNA分子呈松弛状态。（不需要ATP供能）。 拓扑异构酶Ⅱ（旋转酶）：将DNA特定部位的两条链均切开，在无ATP存在时，使DNA分子去除负超螺旋，变为松弛状态。在有ATP供能时，可形成负超螺旋。 DNA聚合酶催化的链延长反应 大肠杆菌三种DNA聚合酶比较 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅲ全酶的结构和功能 DNA聚合酶的3′- 5′外切酶水解位点 DNA聚合酶5′- 3′外切酶活力 三、DNA复制的起点和方向 四、原核细胞DNA的半不连续复制复制过程 大肠杆菌复制起点成串排列的重复序列 大肠杆菌复制体结构示意图 复制叉处前导链和随后链同时合成的工作模型 大肠杆菌染色体复制的终止 复制的忠实性 起始时以RNA作为引物的作用 DNA聚合酶的校对功能 DNA聚合酶的校对功能 五、真核细胞DNA复制的特点 真核生物的DNA聚合酶 端粒酶（telomerase） 端粒合成的一种模型 真核和原核DNA细胞复制比较 六、 逆转录作用 逆转录过程中cDNA的合成 逆逆转录病毒的生活周期生活周期 七、 DNA的损伤与修复 DNA的突变 DNA突变的类型 DNA的修复主要有以下类型: 一、光裂合酶修复 DNA紫外线损伤的光裂合酶修复 DNA的损伤和切除修复 DNA的重组修复 SOS反应的机制 第五节 DNA的遗传重组 5′-核酸外切酶 3′-核酸外切酶 裂缝 聚合中心 裂缝内部 聚合酶 错配硷基 复制方向 正 确核苷酸 5′ 5′ 5′ 3′ 3′ 3′ 切除错配核苷酸 ? 多个起点复制 起点 起点 起点 起点 起点 起点 ? 真核生物的DNA聚合酶 ? 端粒（telemere）复制 DNA 聚合酶 ? 分子量 亚基数 细胞内分布 酶活力百分比 外切酶活力 DNA 聚合酶 ? 110-23，000 多个 细胞核 ～80% 无 120，000 一个 线粒体 2 ～15% 3?-5 ?外切酶 400，000 二个 细胞核 10 ～25% 3?-5 ?外切酶 DNA 聚合酶 ? DNA 聚合酶 ? 45，000 一个 细胞核 10 ～15% 无 聚合酶ε具3?-5 ?外切酶活性，校正、修复和补缺。 作用 合成引物及后随链 修复 复制与修复 合成先导链,校正　　　　　　　　　　 DNA复制需要引物，但在线形DNA分子末端不可能通过正常的机制在引物被降解后合成相应的片段.如果没有特殊的机制合成末端序列，染色体就会在细胞传代中变得越来越短。这一难题是通过端粒酶的发现才得到了澄清，端粒酶是一种含RNA的蛋白复合物，实质上是一种逆转录酶，它能催化互补于RNA模板的DNA片段的合成，使复制以后的线形DNA分子的末端保持不变。 初步研究表明，人体中生殖细胞的端粒长度保持不变，而体细胞的端粒长度则随个体的老化而逐步缩短。对此的一个推论是：人的生殖细胞具端粒酶的活力，体细胞则否。这一问题的解决无疑会有助于对生命衰老的认识。 5′ 3′ AAAACCCCAAAACCC C C C A 端粒酶 3′ 5′ TTTTGGGGTTTTG 5′ 3′ AAAACCCCAAAACCC C C C A AA 3′ 5′ TTTTGGGGTTTTGGGGTTTTG 5′ 3′ AAAACCCCAAAACCC C C C A AA T TGGG TGGG T 3′ 5′ AA TTTTG 5′ 3′ AAAACCCCAAAACCC C C C A GTTTTG 整合和杂交 移位和再杂交 端粒合成的完成 TTT