LC-MS技术在中药分析应用.pptVIP

LC-MS 技术在中药分析的应用（一） 宋 越 2007 /05 质谱与液质联用技术原理 概 念 质谱法是将样品离子化，变为气态离子混合物，然后利用不同离子在电场或磁场中运动行为的不同，把离子按质荷比（m/z）分离的分析技术。通过所得到的样品的质谱和相关信息，进行定性与定量分析。 质谱仪是实现上述分离分析技术,从而测定物质的质量与含量及其结构的仪器。 质谱分析的基本过程 样品的离子化 用适当的方法使样品分子转变为气态离子，对于有机化合物，如果在离子化过程中接受了过多的能量，新生成的分子离子(molecular ion)会进一步裂解，生成各种碎片离子(fragment ions)。 离子的分离、分析、检测。 数据采集与处理。 常用术语 质荷比 m/z,，是离子的质量和该离子所带静电单位数的比值。 基峰与相对强度 基峰（base peak）是质谱图中的最强峰。质谱峰的强度常以相对强度（relative intensity）衡量。以基峰的强度为100，算出各个质谱峰的相对百分强度。 分子离子 分子离子是样品分子失去或得到一个电子而形成的。分子离子代表完整的样品分子，是其所有碎片离子的终极前体(ultimate precursor)。 准分子离子 取决于化合物的性质和质谱离子化方法及条件，可生成质子化或去质子的分子，即[M+H]+、[M-H]－及加合物离子，如[M+Na]+、[M+Cl]－等，这些均为偶电子（even electron）离子。 同位素峰 这是由于有丰度较低的同位素存在而产生的 。 质 谱 仪 质谱仪由以下几部分组成 进样系统 直接进样杆（direct inlet probe, DIP） 加热贮槽进样器（heatable reservoir inlet） 气相色谱/质谱法（gas chromatography/mass spectrometry, GC/MS） 液相色谱/质谱法（liquid chromatography/mass spectrometry, LC/MS） 毛细管电泳/质谱法(capillary electrophoresis chromatography/ mass spectrometry, CE/MS) LC-ESI/MS 进样系统 输注 (infusion) 注射器泵（syringe pump）将样品溶液直接缓慢输入ESI/MS离子源。这种方法简便、快速。缺点是需要相对多的样品（通常将样品配成溶液，样品体积大于10 ?l）；样品中其它物质可能产生干扰；难于实现自动进样分析。 流动注射（flow injection） 将样品溶液置于HPLC进样系统，由LC泵缓慢推动溶剂将注入的样品溶液直接输入ESI/MS 离子源。这个方法同样简便、快速；样品溶液的用量可很小（如0.1?L）；易于实现自动进样分析。缺点是样品中盐和其它成分可能干扰测定；进样过程中样品溶液可能被稀释，从而降低检测限。 离 子 源 作用 使被分析样品的原子或分子转化为带电粒子(离子)的装置,并对离子进行加速 常见离子化方法 EI (Electron Impact Ionization)：电子轰击电离——硬电离 CI (Chemical Ionization)：化学电离——核心是质子转移 FD (Field Desorption)：场解吸——目前基本被FAB取代 FAB (Fast Atom Bombardment)：快原子轰击 MALDI (Matrix Assisted Laser Desorption)：基体辅助激光解吸，基质辅助激光解吸电离 电子轰击离子化(electron impact ionization, EI) 主要用于挥发性样品的电离，由GC或直接进样杆进入的样品，以气体形式进入离子源，由灯丝F发出的电子与样品分子发生碰撞使样品分子电离。在70ev电子碰撞作用下，有机物分子可能被打掉一个电子形成分子离子，也可能会发生化学键的断裂形成碎片离子。 快原子轰击源（Fast Atomic bombardment, FAB） 主要用于极性强、分子量大的样品分析。例如肽类、低聚糖、天然抗生素、有机金属络合物等。FAB源得到的质谱不仅有较强的准分子离子峰，而且有较丰富的结构信息。 激光解吸离子化 (laser desorption ionization, LDI) 利用一定波长的脉冲式激光(短脉冲)照射样品使样品电离的一种电离方式。 基质辅助激光解吸离子化（matrix-assisted laser desorption ionization, MALDI） 脉冲工作方式，适合于TOF，FT MS, 属于软电离技术，适合于分析生物大分子，如