反相高效液相色谱法分离果树中的内源激素.pdfVIP

反相高效液相色谱法分离果树中的内源激素 付蕾王明林汪建民 (山东农业大学泰安271叭8) 1 前言 内源激素是控制植物生长发育的极微量物质，其产生的部位、数量和种类的平衡对器 官的分化形成及质量具有主导作用。了解植物体内内源激素的含量变化规律及与生长和分 化的关系，在理论和实践上都有十分重要的意义。本文主要结合我们的工作，介绍果树内 源激素的高效液相色谱(}mLC)定量分离测定方法”1。 2实验方法 2．1仪器和药品 氯仿、乙酸乙酯等均为国产分析纯试剂，使用前重蒸。 2．2样品处理 2．5氯仿萃取IAA和ABA。 取苹果幼树梢尖，加80％冷甲醇浸提，pH8．0氯仿脱色，pH 8．O下加聚乙烯吡咯烷酮(PVP)振荡，pH3．O，过Cll 再用乙酸乙酯萃取GA，，两者皆在pH 预柱纯化，进行HPLc分离测定。 8．0水饱 2．5乙酸乙酯脱脂溶性物质，pH 取苹果幼树根样，加80％冷甲醇浸提，pH 8．O，clI预柱纯化，进行}Ⅱ，Lc分 和正丁醇萃取z和(DiH)z。pH3．0，加PVP振荡，pH ’ 离测定o‘。 3结果与讨论 3．1色谱条件 5种内源激素分离检测的色谱条件如表l所示。均采用保留时间和峰高增加法定性 表1 5种内源激素的色谱分离条件 植物激素 色谱柱 流动相 检测波长(nm)流速(mL·mi一) I从 4) 220 1．O 掣-BondpaI【C¨P(McoH)：y(坞o)=55：45(pH ABA l 0 掣-BondpakCn矿(Me0H)：y(H，O)=55：45(pH4)244 G～ 胂mdp蝎。器裂；器凳户∥m删 20， 10 Z．(DiH)Z 35) 268 O8 SphcfisorbClly(Me0H)：矿(H，0)=叮5：25(pH ．179． 0 {型 擎 瞽0 隶 氍 200 220 240 260 280 nm 圈1 4种内源激素的紫外吸收曲线 1．IAA·2．ABA，3．G～，4．Zcaljn． 2 4 c_吕≈ 6 8 2 t 口一目≈ 图2标样l从，A队(a)和苹果幼辩梢尖提取液(b)色谱田(^-220m) 口_目≈ 0 5 口_g} 10 15 图3标样GA。(a)与苹果幼树梢尖提取液(b)的HPLc图 ．180． J_-。_。________‘_。_。·-‘_____。●____________-。·____。__。一 0 2 4 6 8 ，—t—f—F—盲_ f，min