一体化聚苯乙烯微流控电喷雾芯片研制.pdfVIP

2010年微纳尺度分离和分析技术学术会议暨第六届全国微全分析学术会议 一体化聚苯乙烯微流控电喷雾芯片的研制 董媛媛 何巧红* 陈恒武 浙江大学 化学系 微分析系统研究所 杭州 310058 电话：0571 Email ：heqh@zju.edu.cn 质谱（MS ）是生命科学研究中的重要分析手段之一。微流控芯片（MFC ）具有样品消 耗量小、集成化程度高、分析速度快等优点。微流控芯片与质谱的联用可以实现微量生物样 品的在线预处理、分离与检测。两者联用的关键是接口技术，目前最常见的是通过电喷雾离 子化（ESI ）技术，使微流控芯片与质谱仪耦联（MFC-ESI-MS ）。已报道用于MFC-ESI-MS 联用系统中所采用微流控芯片包括：带有进样探针的玻璃芯片和高聚物芯片[1]、一体化玻璃 [2] [3] 芯片和高聚物芯片 等。聚苯乙烯（PS ）是一种生物兼容性好的高聚物材料 ，在生化分析 中具有广泛的应用。采用PS为材质制备与ESI-MS联用的微流控芯片尚少见报道。 实验部分 一体化PS 电喷雾芯片的制作 热压法在PS基片上加工微通道，参考文献[4]在PS盖片上 制备金膜微电极（图1a）；通过切割打磨在基片通道末端及盖片的一侧加工成图1b所示的尖 状；将加工有微通道的基片和带电极的盖片置于低压汞灯（254 nm ）下，通过掩膜对通道区 域光照2 h ， PS光照选择性区域的表面产生羧基；然后将其浸入0.36 mol/L 的乙二胺溶液中 （含50 mmol/L的EDC作为偶合剂），进行氨化处理，形成氨基。3.27 MPa压力和88 ℃ 温 度下，封接芯片。将5 %戊二醛引入通道，反应14 h，磷酸缓冲液洗去未反应的戊二醛，引 入1 mg/mL 胰蛋白酶溶液（用pH=7.0 ，0.1mol/L 的磷酸缓冲液配制），4 oC 下反应24 h 。最 终形成了金薄膜电极-蛋白酶解反应器的一体化微流控电喷雾芯片。 （a ） （b ） 图1 集成化蛋白酶解微流控电喷雾芯片结构示意图 结果与讨论 一体化探针式PS微流控电喷雾芯片的制作 将微流控芯片出口磨尖、形成一体化探针， 较采用组装式毛细管探针的优势是在毛细管探针-芯片连接处不存在死体积。本文分别在一 片PS上热压通道，另一片PS上区域化学镀加工薄膜金电极后，在两片PS 的通道末端处切割 打磨成针尖状( 图1b)，封合后形成一体化的电喷雾探针。但是，PS芯片封合后再进行打磨时 易开裂，较高温度和压力可以保证芯片的封合牢度，但通道易塌陷阻塞。通过一系列的封接 温度和压力的条件优化，本文选择88 oC，3.27 MPa 的封合条件，可以实现芯片的有效封合。 集成金膜电极的PS 微流控电喷雾芯片性能试验 化学镀制备在PS 芯片上的薄膜金电 极，施加电压为1.0 kV～3.5 kV，持续工作数小时，电极性能稳定，而且不会因电压和溶液 的作用而剥落。在喷雾电压2.8 kV～3.0 kV，流速400 nL/min～600 nL/min 条件下，电喷雾 稳定（如图2a ）。以利血平为分析对象，质谱检测结果如图2b 所示，峰形良好，基线稳定。 2010年微纳尺度分离和分析技术学术会议暨第六届全国微全分析学术会议 图2 电喷雾照片(a)和10 nM 利血平(b)的MFC-ESI-MS 图谱。1:1 (V/V)甲醇/水；喷雾电压：3 kV；流速： 400 nL/min 。 图3 未经酶解(a) 和在线胰蛋白酶酶解(b)的细胞色素C 的MFC-ESI-MS 图谱 微流控在线酶解反应器 戊二醛法是固定化酶的一种常用方法之一。本文采用在掩膜辅 助下，经 254 nm 的紫外光辐射后在通道表面形成羧基-COOH[4]，经乙二胺胺化后与戊二醛 反应。银镜反应结果表明仅在光照的PS表面接枝上了戊二醛。封合后，再将胰蛋白酶通过 与戊二醛偶联固定于通道内壁。细胞色素C经固定化胰蛋白酶在线酶