TAT-Cytoglobin融合蛋白的原核表达、纯化和生物活性分析.pdfVIP

生 物 工 程 学 报 张如婧 等/TAT-Cytoglobin 融合蛋白的原核表达、纯化及生物活性分析 1247 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn August 25, 2014, 30(8): 1247−1255 DOI: 10.13345/j.cjb.130573 ©2014 Chin J Biotech, All rights reserved 医学与免疫生物技术 TAT-Cytoglobin 融合蛋白的原核表达、纯化及生物 活性分析 1 1,2 1 1,2 张如婧 ，李招发 ，施伟杰 ，许瑞安 1 华侨大学生物医学学院，福建 泉州 362021 2 分子药物教育部工程研究中心，福建 泉州 362021 张如婧, 李招发, 施伟杰, 等. TAT-Cytoglobin 融合蛋白的原核表达、纯化及生物活性分析. 生物工程学报, 2014, 30(8): 1247−1255. Zhang RJ, Li ZF, Shi WJ, et al. Expression, purification, and characterization of fusion protein TAT-Cytoglobin. Chin J Biotech, 2014, 30(8): 1247−1255. 摘 要: 旨在利用细胞穿膜肽TAT 的穿膜作用和细胞珠蛋白 (Cytoglobin, Cygb) 的抗衰老、抗纤维化的功能， 将二者通过基因工程的手段融合在一起，以期获得能够穿透细胞屏障的Cygb 。通过两次重叠PCR 技术获得了 TAT-Cygb DNA ，将其插入原核表达载体pET22b 质粒中，转化至大肠杆菌BL-21, 筛选出可表达TAT-Cygb 融 合蛋白的大肠杆菌工程菌株。经乳糖诱导表达 TAT-Cygb ，CM 阳离子交换层析 (CM Sepharose Fast Flow Protocol) 获得纯度高达95%的TAT-Cygb 融合蛋白，分子量约23 kDa 。生物活性实验显示，TAT-Cygb 过氧化 物酶比活力达到(422.30±0.36) U/mg 。TAT-Cygb 预处理的Hacat 细胞可免受H O 氧化应激的损伤 (RGR=100%) ， 2 2 同时TAT-Cygb 可治疗已被H O 氧化损伤的细胞 (RGR=98%) ，与Cygb 处理组相比具有显著差异 (RGR=79%) 。 2 2 该研究首次成功利用大肠杆菌表达系统表达了可穿透细胞膜的、有生物活性的TAT-Cygb 融合蛋白，为继续开 展 Cygb 在抗衰老、抗纤维化和抗癌领域的研究奠定了基础。 关键词: 细胞穿膜肽，细胞珠蛋白，融合蛋白，纯化，氧化应激 Received: November 11, 2013; Accepted: December 13, 2013 Supported by: National Natural Science Foundation of China (Nos.. Corresponding author: Zhaofa Li. Tel/Fax: +86-595 E-mail: lizhaofa@ 国家自然科学基金 (Nos. 资助。 网络出版时间：2014-02-25