实时荧光定量PCR和甲基化特异性PCR检测结直肠癌APC、MLH1基因甲基化状态.pdfVIP

胃肠病学 2011年第 16卷第2期 实时荧光定量 PCR和甲基化特异性 PCR检测 结直肠癌APC、MLH1基因甲基化状态 米 潘程宇 曹 俊 z 季 兴3 张丽莉 z 郭慧敏 邹晓平 南京医科大学鼓楼临床 医学院消化科 ’ 210008 南京大学医学院附属鼓楼医院消化科 南京医科大学附属南京儿童 医院药剂科 3 背景：启动子区甲基化致肿瘤抑制基因失活在结直肠癌的发生、发展中起重要作用 ．检测肿瘤相关基因的甲基 化状态 ，可能为寻找新 的结直肠癌诊断、预后相关标记物提供依据 。 目的：比较实时荧光定量 PCR FQ．PCR 与甲基 化特异性PCR MSP 检测基因甲基化状态的差异。方法：以FQ—PCR检测 66例结直肠癌组织和 20例癌旁组织中与 结直肠癌 的发生 、发展相关的抑癌基 因APC和错配修复基因MLH1的甲基化状态 ．同时 以MSP检测结直肠癌组织 中APC基 因的甲基化状态 。结果：根据 FQ．PCR结果 ，结直肠癌组织 中APC、MLH1基 因甲基化阳性率显著高于癌 旁组织 48．5％和 54．5％对 0％和0％．尸_0．000 。FQ．PCR和MSP可检出的甲基化阳性对照DNA最低浓度分别为 0．015ng／Ix1和 1．5ng／~l，两者对 APC基因甲基化状态的检测结果差异有统计学意义 P O．05 。结论 ：在 DNA甲基化 的检测手段 中．FQ．PCR的敏感度优于 MSP 关键词 结直肠肿瘤 ； DNA甲基化 ； 基因，APC； 基 因，MLH1； 甲基化特异性 PCR； 实时荧光定量 PCR Detection ofAPC and MLH1GeneHypermethylation with Real-timeFluorescentQuantitativePCR and Methylation-specificPCR inColorectalCancer Ⅳ Chengyu，CA0Jun，JIXing,ZHANGLili，GUOHuimin，ZOU Xiaoping．DepartmentofGastroenterology,TheDrum TowerClinicalMedicalCollegeofNanjingMedical University, Nanjing 210008 C0rrespOndenceto：Z0UXiaoping，Email：zouxiaoping795@hotmail．corn Background： Inactivation oftumorsuppressorgenesby promotormethylation playsan importantrole in the developmentand progression ofcolorectalcancer．Detection ofhypermethylation oftumorigenesis-related genesmight providepromisingbiomarkersforthediagnosisandprognosisofcolorectalcancer．Aims：Tocomparethevalueofreal— timefluorescentquantitativePCR FQ-PCR andmethylation-specificPCR MSP fordetectingthegenemethylation． M ethods：HypermethylationsoftumorsuppressorgeneAPC and mismatchrepairgeneMLH1，whichwererelatedwith thedevelopmentandprogressionofcolorectalcancer，weredetectedin66colorectalcancerspecimensand20adjacent tissuespecimensbyFQ—PCR．Meanwhile，hypermethylationofAPCincolorectalcancerspecimenswasalsodetectedby MSP．Results：APC hypermethylationandMLH1hypermethylationweredetectedin32and36casesofcolorectalcancer tissuesrespectivelybyFQ-PCR，withthepositivityratessignificantlyhigherthanthoseinadjacenttissuesf48-5％and54．5％ US．0％and0％．P 0．ooo ．Theminimumconce