重组肾上腺髓质素表达载体的构建和在哺乳动物细胞中的表达.pdfVIP

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2015-08-03 发布于安徽
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重组肾上腺髓质素表达载体的构建和在哺乳动物细胞中的表达.pdf

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生理学报　A cta Physiologica S inica , February 25 , 2003 , 55 ( 1) : 71～74 71 　　研究论文重组肾上腺髓质素表达载体的构建及在哺乳动物细胞中的表达王小芳 , 邵　颖 , 田德志, 姚　泰 , 陆利民3 复旦大学上海医学院生理与病理生理学系 , 上海 200032 ( ) 摘　要 : 　为探索通过体内表达肾上腺髓质素 adrenomedullin , AM 治疗高血压和慢性心衰的可能性 , 本实验构建了重组AM 真核表达载体 , 并在无内源性 AM 表达的 K 细胞株上进行了体外表达实验。实验中采用 RT2PCR 技术 562 扩增 AM cDNA 片段 , 并将扩增的 cDNA 片段插入pcDNA3 11 真核表达质粒 , 构建成含 AM cDNA 的重组质粒pcD2 NA3 11AM 。用脂质体介导将该质粒转染培养的人白血病细胞 K 株。在转染的细胞中 , 用 RT2PCR 检测证实有 AM 562 mRNA 存在 ; 用斑点免疫分析方法检测转染细胞的培养液上清 , 证实有 AM 多肽存在 , 表明本实验中构建的重组 pcDNA3 11AM 载体能够在哺乳类细胞中表达 AM 。关键词 : 肾上腺髓质素; K 细胞 ; 基因表达 ; 脂质体 562 中图分类号: Q463 ; R33113 Construction of pcD NA3 11AM and expression of adrenomedullin in mammalian cells 3 WAN G Xiao2Fang , SHAO Ying , TIAN De2Zhi , YAO Tai , L U Li2Min Depart ment of Physiology and Pathaphysiology , S hanghai Medical College , Fudan U niversity , S hanghai 200032 Abstract : 　 The newly discovered endogenous vasodilating and diuretic peptide adrenomedullin (AM) was considered to be of attractive value in clinical treatment of hypertension and congestive heart failure. In order to explore the treatment of cardiovascular diseases by expressing AM in vivo , AM cDNA was inserted into mammalian expressing vector pcDNA3 11 , and in vit ro expression of AM was carried out in cultured K cell line. AM mRNA was amplified by RT2PCR from the total