纸层析法鉴定转氨酶转氨基作用实验新方法.pdfVIP

2010 NO.08 科技资讯 SCIENCE TECHNOLOGY INFORMATION 污染及防治 纸层析法鉴定转氨酶的转氨基作用实验的新方法 魏涛 ( 徐州医学院基础学院 江苏徐州 2 2 1 0 0 4 ) 摘 要:通过对展开剂配方、层析温度、显色方法等研究,解决了原实验既污染环境、危害人体健康又浪费时间的问题,从而找到了纸层 析法鉴定转氨酶的转氨基作用实验的新方法。结果表明,此方法简单易行,耗费低廉,基本上不污染环境,是一个值得在高校生物化学实 验室推广的新实验方法。 关键词: 展开剂 转氨基 新实验方法 中图分类号:TQ 文献标识码:A 文章编号: 16 72 -3 7 9 1(2 0 10) 0 3 (b ) -0 14 5 -02 “纸层析法鉴定转氨酶的转氨基作用” ( 1)取两支离心管,编号:a(测定管) 、b (对 放在红外线干燥器中层析( 约15分钟),层析 是生物化学的一个基础性实验, 总结近几 照管) ,a管加入0 .5mL 肝匀浆,b 管加入煮沸 结束, 取出滤纸, 原实验方法用吹风机吹干 年的实验教学经验, 笔者发现过去的实验 的肝匀浆0 .5mL 。(2) 两管内依次各加入0 . 滤纸( 约5分钟) ,新实验方法将滤纸放入干 方法( 参阅徐州医学院生物化学实验教学 1mol ／L丙氨酸溶液0.5mL 、0. 1mol ／L α～ 燥器内烤干( 约2 分钟) 。 用的《生物化学实验指导》) ,有几种实验试 酮戊二酸溶液0.5mL 、0. 1mol ／L(pH7 ．4)磷 2 . 6 显色 剂和几个实验步骤需要改进,例如:实验试 酸盐缓冲液1.5mL ,摇匀。(3) 两管均放到恒 旧方法用喷瓶向上述滤纸上均匀喷上 剂所用的展开剂(酚水饱和液) 、用丙酮配制 温循环水浴箱保温37 ℃, 1小时后取出。(4) 旧 0 .5% 茚三酮丙酮溶液,用吹风机吹干滤纸, 的茚三酮溶液等有毒试剂易挥发, 污染环 方法把测定管放到沸水浴中煮沸5分钟,取 可见出现同心弧紫色斑。新方法将一定量 [3] 境,影响师生身体健康; 实验步骤肝匀浆在 出冷却;新方法可省略此步骤。(5)两管皆离 的茚三酮加到展开剂中 (值得注意的是用 沸水中加热10 分钟等操作不方便,且比较 心3500rpm5分钟,把上清液分别加入两支小 展开剂配制茚三酮溶液时, 如果配好展开 复杂、费时。针对上述问题, 结合我校实际 试管中,标清管号,供层析用。 剂后再放入茚三酮,则茚酮不容易溶解, 由 情况, 笔者进行了大量的实验摸索,找到了 2 . 3 标记 于茚三酮溶于正丁醇, 所以可先将茚三酮 一种切实可行、又相对环保、效果良好的新 用肥皂水把手洗干净,操作中尽可能少 称量好, 放入小烧杯, 用正丁醇溶解, 再转 实验方法。 用手接触滤纸, 以免污染滤纸;取出滤纸一 入试剂瓶, 最后加入其他试剂, 摇匀即 张放在干净的白纸上, 以圆点为中心,约0 . 可。) , 故从干燥箱内拿出时即出现同心弧 1 材料和仪器 6cm半径,用铅笔轻轻划圆线作基线,在线上 紫色斑,用铅笔圈下各色斑, 比较色斑的位 新鲜