3-氧十二烷酰高丝氨酸内酯对淋巴细胞Toll样受体2和4的影响.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2010，26(5)：1003—1005 · 1003 · [文章编号] 1000—4718(2010)05—1003—03 3一氧十二烷酰高丝氨酸 内酯对淋巴细胞 Toll样受体 2和 4的影响 芦 起 ， 余加林 ， 杨锡强 ， 刘 伟 (重庆医科大学附属儿童医院，重庆 400015) [摘 要] 目的：研究铜绿假单胞菌群体感应 (Qs)系统信号分子3一氧十二烷酰高丝氨酸内酯 (3一O—C12 一 HSL)对人外周血淋巴细胞增殖、TLR2／4mRNA表达以及单个核细胞分泌TNF一 的影响。方法：自健康献血 者血液中分离单个核细胞进行体外培养，并以0、1、10、50、100~xmol／L3一O—C12一HSL作用 12h，分离淋巴细胞 ， 采用Mq3法，观察不同浓度的3一O—C12一HSL分别作用对人淋巴细胞生长增殖的影响。用 RT—PCR测定淋巴 细胞TLR2／4mRNA表达。收集上清，以双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)法测TNF— 。结果：3一O—C12一 HSL刺激 12h后淋巴细胞TLR2／4mRNA表达增高，且呈剂量依赖关系，TLR2／4mRNA在 100txmol／L时最为显著 (0．723±0．005，0．363±0．013)，P0．05。TLR2变化较TLR4明显，P0．05。3一O—C12一HSL对淋巴细胞增殖 有促进作用 ，呈剂量依赖关系，在 100I~mol／L时最为显著 (0．463±0．052)，P0．05。3一O—C12一HSL能抑制单 个核细胞分泌TNF一0，【且呈剂量依赖关系，在 100i~moL／L时最为显著 (267．090±13．878)，P0．05。结论 3一O — C12一HSL可以激发淋巴细胞细胞增殖 ，上调Toll样受体的表达水平 ，Toll样受体表达上调抑制TNF— 表达，获 得性免疫对固有免疫有反馈作用。 [关键词] 假单胞菌，铜绿；受体，淋巴细胞；3一氧十二烷酰高丝氨酸内酯 [KEYWORDS] Pseudomonasaeruginosa；Receptors，lymphocyte；N一3一oxododeeanoyl—L—homoserinelactone [中图分类号] R392 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2010．05．036 铜绿假单胞菌是医院感染中最常见的机会致病菌。它 DMSO购 自Sigma，淋巴细胞分离液购 自天津灏洋生物制品科 常引起急性和慢性肺部感染，多见于局部或全身免疫功能障 技有限公司。RNA提取试剂盒购 自北京 Biotake公 司，逆转 碍的患者。现代微生物学观点认为铜绿假单胞菌 (Pseudo— 录一聚合酶链反应 (reversetranscriptionpolymerasechainreac· nlorAlT~aemginosa，PA)感染大多以生物膜形式存在 。PA内 tion，RT—PCR)试剂盒和DNAmarker购 自大连宝生物工程 各个细胞间的交流有赖于群体感应系统 (quorum—sensing， 有限公司，PCR引物由上海生工生物工程公司合成，CD3单 Qs系统)。Qs系统不仅在调节铜绿假单胞菌生物膜形成上 ， 克隆抗体、人TNF—Ot试剂盒购 自深圳晶美生物工程有限公 而且在免疫调节上均有关键作用 J。Toll样受体 (Toll—like 司。 receptor，TLR)是一组重要的免疫模式识别受体，TLR信号转 2 外周血淋巴细胞 的分离和分组 导在启动机体的固有免疫反应、介导获得性免疫反应中起到重 取健康献血者外周静脉血40mL，肝素抗凝，以淋巴细胞 要作用。本研究探讨Qs系统信号分子对外周血淋 巴细胞增 分离液分离出外周血单个核细胞 (peripheralbloodmononucle— 殖、TLR2、TLR4表达，及肿瘤坏死因子 (tumornecrosis—Ot， arcells，PBMCs)，PBS充分洗涤，用含 10％小牛血清 RPMI一 TNF一 )分泌的影响。