ADM和ADT对肺动脉平滑肌细胞胶原合成及磷酸化ERK1／2表达的影响.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2011，27(．8)：1623—1628 · 1623 · [文章编号] 1000—4718(2011)08—1623—06 ADM 和 ADT对肺动脉平滑肌细胞胶原合成及 磷酸化 ERK1／2表达的影响 张 磊 ，赵翠芬 ， 李福海 ， 王 荣 ， 夏 伟 (山东大学 齐鲁医院儿科 ，卫生部教育部心血管功能重塑与功能研究重点实验室，山东 济南250012) [摘 要] 目的：检测不同浓度的肾上腺髓质素 (ADM)和肾上腺加压素 (ADT)对培养的Wistar大 鼠肺动脉 平滑肌细胞(PASMCs)I、Ⅲ型胶原合成和磷酸化细胞外信号调节激酶(P—ERK1／2)表达的影响，探讨 PASMCs增 殖过程中ERK途径是否被激活。方法：取健康雄性 Wistar大鼠，行大鼠远端 PASMCs分离并进行原代培养，采用 小鼠抗人平滑肌0【一actin单克隆抗体对培养细胞进行鉴定；在培养基内分别加入 l0 moL／LADM或ADT培养72 h后加入兔抗大鼠I型、Ⅲ型胶原抗体和兔抗大鼠P—ERK1／2抗体，0．01mol／LPBS作阴性对照，FITC标记山羊抗 兔IgG为Ⅱ抗 ，免疫荧光法观察PASMCs内I、Ⅲ型胶原及P—ERK1／2表达。Westernblotting检测 1O～mol／L、10 mol／L和 10 moL／LADM或ADT对P—ERK1／2蛋白表达的影响。结果：经平滑肌 —actin单克隆抗体对培养细 胞进行鉴定，其纯度达97％。10 mol／LADM可抑制 PASMCsI、Ⅲ型胶原及 P—ERK1／2的表达 (P0．05，P 0．01)；10 mol／L的ADT刺激后大鼠PASMCsI、Ⅲ型胶原及P—ERK1／2的表达增强 (P0．05，P0．01)。West． ernblotting结果显示ADM可呈剂量依赖性抑制P—ERK1／2蛋白表达 (P0．01，P0．05)；而ADT也可呈剂量依 赖性促进P—ERK1／2蛋白表达 (P0．01，P0．05)。结论：ADM可抑制大鼠PASMCsI、Ⅲ型胶原及P—ERK1／2 表达，而ADT可促进PASMCsI、Ⅲ型胶原及P—ERK1／2表达，提示PASMCs增殖过程中ERK通路被激活，ADM和 ADT可能通过ERK1／2信号通路来调节PASMCs增殖。 [关键词] 肾上腺髓质素；肾上腺加压素；细胞外信号调节激酶类 ；肺动脉平滑肌细胞；胶原合成 [中图分类号] R363 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2011．08,．031 Effectsofadrenomedullinandadrenotensin on collagen synthesisandex- pression ofphosphorylatedERK1／2inpulmonaryarterialsmoothmuscle cells ZHANG Lei，ZHAO Cui—fen ，LIFu—hai，WANG Rong ，XIA Wei (DepartmentofPediatrics，QiluHo~ital，TheKeyLaboratoryofCardiovascularRemodelingandFunctionResearch，Chi— ncseMin~tryofEducationand Chinese^以ntryofPublicHealth，ShandongUniversity，Jinan250012，China．E—mail： zhaocuifen@sdu．edu．cn) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatetheactivationofextracellularsignal—regulatedkinase(ERK．)duringthepro— liferationofculturedratpulmonaryartery smoothmusclecells(PASMCs)，andtostudytheregulatory effectofad—