ILKsiRNA对高糖刺激的人肾小管上皮细胞GSK-313；及β-catenin表达的影响.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2014，30(3)：503．508 · 503 · [文章编号] 1000—4718(2014)03—0503-06 ／LKsiRNA对高糖刺激的人肾小管上皮细胞 GSK-3I3；及 I3}-catenin表达的影响 闰 结 ， 姚 芳 ， 张丽萍 ， 郝 军 ， 吴海江 ， 段惠军 (河北医科大学 第二医院肾内科，病理教研室，河北 石家庄050000) [摘 要] 目的：探讨高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中整合素连接激酶小干扰RNA(ILKsiRNA)对糖原合 成酶激酶3B(GSK-3B)磷酸化和 B-连环蛋白(p—catenin)核 内表达的影响及意义 。方法：体外培养人近端肾小管 上皮细胞系HKC，分为正常对照组(NG)、高糖组(HG)、高糖+阴性转染对照组 (HG+HK)和高糖 +IKL siRNA组 (HG+IKL siRNA)。倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达。RT—PCR及Westernblotting检测 ILKmRNA及蛋 白表达水平；免疫细胞化学检测磷酸化GSK-3p(p-GSK一3p)和 p—catenin表达。Westernblotting检测总 GSK一3p、P- GSK-331、核31-catenin、总B-catenin、E一钙黏蛋白(E-cadherin)和 一平滑肌肌动蛋白(a-SMA)的表达水平。结果：(1) 倒置荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白表达，证实构建的siRNA重组质粒成功转染 HKC细胞 ；(2)与HG和 HG+ HK组相比，HG+ILKsiRNA组ILKmRNA及蛋白水平下降，但较NG组表达仍高；(3)HG+IKL siRNA组IKL 基因 沉默后 ，p-GSK一3p与核 B．catenin蛋白表达较 HG及 HG+HK组均下降，但较 NG组表达仍高。而总GSK-3B与总 p．catenin在各组表达无明显差异。结论 ：ILK、GSK．3p和p—catenin可能参与了高糖介导的肾小管上皮细胞转分化 过程。ILK可能通过调节Wnt／31一catenin途径下游效应蛋白GSK一3p和 p—catenin的表达而促使肾小管上皮细胞转 分化。 [关键词] 糖尿病肾病；上皮一间充质转化；整合素连接激酶；小干扰RNA；糖原合成酶激酶3B；3-连环蛋白 [中图分类号] R363 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000-4718．2014．03．020 Role0f皿 siRNAonexpressionofGSK-313and catenininhumantu- bularepithelialcellsstimulatedbyhigh glucose YANZhe ，YAOFang，ZHANGLi．ping，HAOJun，WUHai-jiang，DUANHui． · 2 jun (DepartmentofNephrology，TheSecondHospital，DepartmentofPathology，HebeiMedicalUniversity，Shijiazhuang 050000，China．E—mail：duanhj999@163．com) [ABSTRACT] AIM：ToinvestigatetheeffectsofsiRNAtargetingintegrin-linkedkinase(IKL)ontheexpression ofglycogensynthasekinase3B(GSK-3p)and13-cateninduringepithelial-mesenchymaltransition(EMT)inhumankid— neyproximal tubulra epithelialcelllineHKC inducedbyhigh glucose．M ETHODS：HKC cellsweredivided into4 groups：normalgIucose(NG)group，highglucose(HG)