BS69的亚细胞定位及其核输出信号序列的分析鉴定.pdfVIP

国病理生理杂志 ChineseJournalofPt巳Y! Q ：i!12；三箜= !竺 · 2l45 · [文章编号] 1000—4718(2009)11—2145—05 BS69的亚细胞定位及其核输出信号序列的分析鉴定卑 张 超 ， 于 波 ， 邵 勇 ， 杨 虹 ， 张 伟 ， 万 峻。△ (深圳北京大学香港科技大学医学中心，生物医学研究所，广东 深圳 518036；北京大学深圳医院 皮肤科，检验科，广东 深圳 518036；暨南大学药学院，广东 广州 510632) [摘 要] 目的：分析腺病毒E1A相关蛋白BS69不同亚型的DNA序列，寻找新的核输出信号序列，并在 Cos7细胞中表达确定其亚细胞定位。方法：分析数据库中不同BS69亚型DNA序列，与传统和输出信号序列比 对，寻找可能的新的核输出信号序列。采用 DNA重组技术把 BS69不同亚型片段的cDNA插入到真核表达载体 pcDNA3．1上，转染Cos7细胞，用免疫荧光染色方法确定其亚细胞定位，用Westernblotting方法验证不同亚型BS69 在细胞中的功能。结果：在BS69亚型2上面发现 l段富含亮氨酸的基因序列 ，与核输出信号序列极为相似。免疫 荧光染色方法显示 BS69亚型2定位于细胞浆中，而BS69亚型 1和2个亚型共同序列编码的蛋 白质则定位于细胞 核中。BS69亚型2参与了EB病毒潜伏膜蛋白1(Epstein—Barrviruslatentmembraneprotein1，LMP1)介导的信号 转导途径。结论：BS69不同亚型具有不同的亚细胞定位，因此具有不同的生物学功能，其中核蛋白是转录调控因 子，细胞浆蛋白则可能参与鼻咽癌发生发展的调控。 [关键词] 腺病毒EIA相关蛋白BS69；核输出信号序列；亚细胞定位；转录因子 [中图分类号] R34 [文献标识码] A CellularlocalizationofBS69andtheidentificationofitsfunctionainucle． arexportsignalsequence ZHANG Chao，YU B0，SHAO Yong ，YANG Hong，ZHANGWei，WAN Jun (BiomedicalResearchInstitute，Shenzhen—PKU—HKUSTMedcialCenter，Shenzhen518036，China；DepartmentofDer— matology，DepartmentofClinicalLaborato0，PekingUniversityShenzhenHospital，Shenzhen518036，China；Collegeof Pharmaey，JinanUniversit)，Guangzhou510632，China．E—mail：wanj@ttSt．hk) [ABSTRACT] AIM ：ToidentifythenovelnuclearexportsignalbyanalyzingtheDNAsequencesanddetectingthe celllocalizationofdifferentadenovirusElA —associated proteinBS69isoforms．METHODS：BS69DNA sequencesin Emsebldatabasewereblastedandthesequenceofaminoacidswasalingedwiththetypicalnuclearexportsigna1．Different BS69isoform fragmentswereclonedintopcDNA3．1vectorandtransfeetedintoCos7cells．TheBS69localizationwasob— servedbyimmunostainingandthefunctionwasverifiedbyWesternblotting．RESULTS：A novelnuclearexportsingalWas foun