MT1-MMP基因敲除细胞的诱导多能干细胞系的构建.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2011，27(10)：2035—2039 · 2035 · [文章编号] 1000—4718(2011)10—2035—05 · 实验技术 · MT1一MMP基因敲除细胞的诱导多能干细胞系的构建水 王彦霞， 马 玲， 马海英，魏文娟，卢晓梅，金玉楠， 于艳秋 (中国医科大学基础医学院病理生理教研室，辽宁沈阳 110001) [摘 要] 目的：观察野生型鼠和膜 1型基质金属蛋白酶(M”一MMP)基因敲除鼠的成纤维细胞重新编程 为诱导多能干细胞(iPSCs)后，其细胞特性是否具有胚胎干细胞 (ESCs)相似的潜能。方法：利用逆转录病毒介导 0c~／4、Sox2、C—Myc和Kfl4四种基因，转染到野生型鼠和 一MMP基因敲除鼠的成纤维细胞中。iPSCs克隆形 成后，用免疫细胞化学检测ESCs特异性标志的表达情况。体外将 iPSCs通过 “悬滴法”向内皮细胞和心肌细胞分 化，以检测其分化能力。结果：转染野生型鼠和 ”一MMP基因敲除鼠的成纤维细胞2周后 ，可见ESCs样克隆开 始形成。iPSCs明显表达ESCs特异性标志物碱性磷酸酶(AP)、阶段特异性胚胎抗原 一1(SSEA—I)和八聚体结合 转录因子3／4(0CT3／4)。诱导分化的内皮细胞表达早期内皮标志物Flk一1／KDR；诱导分化的心肌细胞出现跳动， 表达心肌标志物肌钙蛋白I。结论：野生型鼠和 一MMP基因敲除鼠的成纤维细胞可被重新编程为 iPSCs，iP． SCs具有ESCs的特征及增殖分化能力，因此可能为再生医学的研究和临床上进行细胞移植治疗提供理想的种子细 胞来源。 [关键词] 胚胎干细胞；诱导多能干细胞；基因， 一MMP [中图分类号] R329．2 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2011．10．036 Induction ofpluripotentstem cellsfrom M T1—．MMP—．deficientcells WANGYan—xia，MALing，MAHai—ying，WEIWen—juan，LUXiao—mei，JINYu— nan。YU Yan—qiu (DepartmentofPathophysiology，BasicMedicalCollege，ChinaMedcialUnive~ity，Shenyang110001，hCina．E—mail： yq @mail．cmu．edu．cn) [ABSTRACT] AIM：Todeterminethedifferenceofbiologicalpotencybetweeninducedpluripotentstemcells(iP- SCs)andembryonicstemcells(ESCs)byinvestigatingtheinductionofreprogrammingofwildtype(wT)andmembrane — type1matrixmetalloproteinase( 一MMP)一deficientmousefibmblastsintoiPSCsinvitro．METHODS：WTand MTl—MMP—deficientmousefibroblastswerereprogrammedtoiPSCsbyretroviral introductionofthe4trna scriptionfac— torsOcd／4，Sox2，C—MycnadKlf4．TheexpressionofESC—specificmarkersalkalinephosphatase(AP)，stagespecific embryonicantigen一1(SSEA一1)nad0ct3／4wasdetectediniPSCsbyimmunocytochemistry．Themethodof“hanging drop”w