DENV2感染外周血单个核细胞增加TNF-α基因启动子区域CpG位点的甲基化水平.pdfVIP

· 150 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2014，30(1)：150—153 [文章编号] 1000—4718(2014)01—0150—04 DENV2感染外周血单个核细胞增加 F一 基因 启动子区域CpG位点的甲基化水平 张英可， 张 林， 齐一鸣， 黄俊琪 (中山大学中山医学院免疫学研究所，教育部热带病防治研究重点实验室，广东 广州 510080) [摘 要] 目的：检测正常人外周血单个核细胞(PBMC)感染2型登革病毒 (DENV2)后肿瘤坏死 因子 Ot (TNF-a)基因启动子区域 CpG位点的甲基化水平。方法：采用亚硫酸氢盐测序 PCR法检测DNA甲基化水平。结 果：TNF-a基因启动子区域为一294bp到+58bp，覆盖 11个散在 CpG位点 ；PCR反应后取PCR产物进行琼脂糖凝 胶电泳分析显示 ，扩增序列大小与理论预测相符合；PBMC感染DENV20h和6h在 l1个甲基化位点中有2个处 于甲基化状态 ，感染12h有6个甲基化位点 甲基化。0h、6h和 12h的平均甲基化率分别为 10．3％、12．1％和 25．5％，且0h和 12h及6h和 12h的甲基化率差异有统计学意义。结论：PBMC感染DENV2后会引起 TNF-a基 因启动子区域的甲基化水平增加。 [关键词] 登革病毒；肿瘤坏死因子仅；DNA甲基化 [中图分类号] R373．33 [文献标志码】 A doi：10．3969／j．issn．1000-4718．2014．01．025 ChangesofDNA methylationatCpG sitesinpromoterregion0萱TNF- geneinDENV2-infectedperipheralbloodmononuclearcells ZHANGYing—ke，ZHANGLin，QIYi—ming，HUANGJun—qi (InstituteofImmunology，ZhongshanSchoolofMedicine，SunYet-senUniversity，KeyLaboratoryofTropicalDiseaseCon— trol，MinsitryofEducation，Guangzhou510080，China．E—mail：huan~q@mail．sysu．edu．cn) [ABSTRACT] AIM：ToexamineDNAmethylationatCpGsitesinthepromoterregionoftumornecrosisfactor·al— pha(TNF-a)geneindenguevirustype2(DENV2)-infectedperipheralbloodmononuclearcells(PBMC)．METHODS： DNA methylationinthepromoterregionofTNF-agenewasmeasuredbybisulfitesequencingPCR．RESULTS：Thepro- moterregionofTNF-agenewasfrom 一294bpto +58bp，including11CpG sites．ThePCR productsidentifiedbyaga— rosegelelectrophoresiswereconsistentwiththetheoretical size．Twositesweremethylatedat0hand6hand6siteswere methyrlatedat12hin删 F—OtgenepromoterregioninDENV2-infectedPBMC．Theaveragemethylationrateswere10．3％ ． 12．1％ nad25．5％ at0h．6hand12h。respectively．Significantdifferencesbetween0hand12handbetween6hand 12hwereobserved．CONCLUSION：Th eDNA methylationinthepromoterregi