NK4基因的克隆及其在Raji细胞中的表达.pdfVIP

· 970 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(5)：970—975 [文章编号] 1000—4718(2009)05—0970—06 NK4基因的克隆及其在 Raji细胞 中的表达 水 滑世轩 ， 岑 东 ， 赵 行 ， 吕建新 ， 涂植光。， 裴仁治 (温州医学院浙江省医学遗传学重点实验室，浙江 温州325027；浙江省鄞州人民医院血液科，浙江 宁波315040； 。重庆医科大学医学检验系 教育部 “临床检验诊断学”省部共建重点实验室，重庆400016) [摘 要] 目的：克隆NK4基因，构建其重组真核表达载体，并观察其在Raji细胞中的表达。方法：从人肝组 织中提取总RNA，行 RT—PCR获得 NK4基因cDNA，与载体pVITRO 一mes构建重组真核表达载体，转染Raji细 胞。潮霉素B筛选后，采用实时荧光定量PCR、ELISA、细胞免疫组化和半固体培养等方法检测 NK4基因在Raji细 胞的表达，筛选稳定表达的细胞株。结果：NK4基因获成功克隆并构建了重组真核表达载体pVITRO 一ures—NK4； 转染NK4基因后的Raji细胞经RT—PCR发现存在特异性DNA片段。NK4基因在Raji细胞可稳定表达 NK4mR— NA和蛋白，且可抑制 Raji细胞的增殖、迁徙和侵袭。结论：NK4基因成功克隆并构建了重组真核表达载体，转染 Raji细胞后表达稳定。 [关键词] 基因，NK4；克隆；基因表达；Raji细胞 [中图分类号] R363 [文献标识码] A CloningandexpressionofNK4geneinRajicells HUAShi—xuan，CENDong，ZHAOHang，LOJian—xin，TUZhi—guang3，PEIRen — zhi2 (ZhejiangProvincialKeyLaboratoryofMedicalGenetcis，WenzhouMedicalCollege，Wenzhou325027，China； DepartmentofHematology，ZhefiangYaizhouPeoplesHospital，Ningbo315040，China ；FacultyofLaboratoryMedicine， KeyLaboratoryofClincialDiagnosticsofEducationMinistryofChina，ChongqingMedcialUniversity，Chongqing410006， China．E—ma il：cendong2002@163．com) [ABSTRACT] AIM：TocloneNK4geneandtoconstructrecombinanteukaryoticexpressionvectorforobserving itsexpressionintransfectedRajicells．METHODS：TotalRNAwasextractedfromhumanhepatictissue．NK4genecD- NA wasamplifiedbyRT—PCR，andthenclonedintovectorpVITRO2一mcstoconstructtherecombinanteukaryoticex— pressionvectorpVITRO2一mcs—NK4．RajicellsweretransfectedbyrecombinantvectorpVITRO2一mes—NK4and screenedbyhomomycinB．ThestablestrainofNK4geneexpressionwasscreenedbyreal —timefluorescentquantitative PCR，ELISA，immunocytohistochemistryandsemisolidculture．RESULTS：ThespecificDNA fragmentWasdetectedby RT—PCRinRajicellstransfectedwithNK4gene．ThetransfectedRajicellsexpresse