gp96-肽复合物体外对脾淋巴细胞基因表达及其抗肿瘤效应研究.pdfVIP

维普资讯 · l724 · ChineseJournalofPathophysiology 2007，23(9)：1724—1727 [文章编号] 1000—4718(2007)09—1724—04 gp96一肽复合物体外对脾淋 巴细胞基因 表达及其抗肿瘤效应研究 朱昌来， 林 琳， 张天一 (南通大学神经再生重点实验室，江苏 南通226001) [摘 要] 目的：研究H22肿瘤细胞来源的gp96一多肽复合物体外对小鼠脾淋巴细胞TNF—Ot、IFN一 mRNA 表达的影响；并观察其培养上清诱导I-I22肿瘤细胞凋亡的形态学变化。方法：利用蛋白提取纯化技术提取 I-I22肿 瘤细胞来源的热休克蛋白gp96，Westernblotting法鉴定所得 目的蛋 白；RT—PCR法检测细胞 TNF一仅和 IFⅣ一 mRNA的表达水平；激光共聚焦显微镜及透射电子显微镜观察细胞培养上清诱导 I-I22肿瘤细胞的形态学变化。结 果：经鉴定获得纯化的热休克蛋白gp96；sp96肽复合物诱导组的脾淋巴细胞 TNF一仅、IFN一 mRNA的表达强度 (RV)分别为0．20±0．02及0．22±0．0l，明显高于对照组的0．11±0．02、0．11±0．0l和0．10±0．0l、0．11±0．0l (P0．05)；实验诱导组的培养上清能诱导 I-I22肿瘤细胞凋亡的形态学改变。结论：I-I22肿瘤来源的热休克蛋白 sp96一肽复合物能在体外增强小鼠脾淋巴细胞TNF一仅、IFN一 mRNA的表达 ；同时，经诱导的脾细胞能分泌免疫 活性物质诱导 I-I22细胞凋亡。 [关键词] sp96；热休克蛋白质类 ；脾淋巴细胞 ；细胞凋亡；基因表达 [中图分类号] R735 [文献标识码] A Geneexpressionofspleenlymphocytesinducedbygp96--peptidecomple-· xesand itsna ti．．．tumoreffect／nvitro ZHU Chang—lai．LIN lin．ZHANG Tian—vi (KeyLaboratoryofNeuroregeneration，NantongUniversity，Nantong226001，China．E—mail：ny@ntu．edu．cn) [ABSTRACT] AIM：TostudytheexpressingvariationofTNF一仅andIFN一 mRNAinmousesplenocytesin- ducedbyI-I22tumorceHsderived heatshockprotein gp96一peptidecomplexesinvitro，andtoobservehtemorphologic changeofI-I22tumorcellswhichtreatedwiththeculture supernatnat．METHODS：H22tumorceHsderivedHSPsp96was obtainedbyhtetechniquesforproteinextractionnadpurificationnadWas identifiedbyWestern blottingmehtod．Theex- pressionvaluesofTNF一仅 nadIFN一 mRNA inspleenlymphocyteswere detcetde bysemi—uqna titativeRT—PCR．The morphologicchnagesofI-I22tumorceHsinducedbyhteculture supernatantwere observde bylaserscnaningconfocal mi· crescopy(LSCM)nadtransmissionelectronmicroscope(TEM)．R