p21活化激酶6削弱非小细胞肺癌A549细胞侵袭及迁移能力的分子机制水.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2014，30(1)：67-71 · 67 · [文章编号] 1000—4718(2014)01-0067—05 p21活化激酶 6削弱非小细胞肺癌 A549细胞 侵袭及迁移能力的分子机制 蔡松旺 ， 李冬霞。， 安 军 ， 张军航 △ (’中山大学附属第三医院胸外科 ，广东 广州 510630；新乡医学院机能实验室，河南 新乡453003) [摘 要] 目的：探讨调控p21活化激酶6(PAK6)的微小RNA(miRNA)与非小细胞肺癌侵袭及迁移的关系， 并了解 PAK6下游分子信号机制。方法：通过生物信息学数据库预测靶向PAK6的miRNA，转染miRNA模拟物及 抑制剂，Westernblotting及实时定量荧光PCR(real-timePCR)检测A549细胞中PAK6的表达量 ，萤光素报告酶实验 检测预测miRNA对 的调控，并行体外迁移及侵袭实验，检测转染 miRNA对PC-3细胞迁移及侵袭能力的影 响。转染目标miRNA及siPAK6，Westernblotting检测A549细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达量。结果：生物信 息学预测miR-23a可能是调控 跖 的靶向miRNA。Westernblotting检测转染miR-23a组PAK6表达量下降69％， 而转染 miR-23a抑制剂组PAK6表达量上升52％，差异均有统计学意义。萤光素报告酶实验结果显示 ，转染 miR一 23a后野生型PAK6组萤光素酶活性下降52％，而突变组差异无统计学意义(P0．05)。Rea1．timePCR检测3组 PAK6mRNA的表达差异无统计学意义 (P0．05)。体外迁移及侵袭实验示 ，转染 miR-23a组迁移细胞数减少 73％，侵袭的细胞数减少59％。Westernblotting检测发现，转染siPAK6组 MMP-9的表达下降85％(P0．01)，转 染 miR-23a组MMP-9的表达下降76％(P0．01)。结论 ：miR-23a通过PAK6．MMP-9信号途径引起非小细胞肺癌 细胞迁移及侵袭能力的下降。 [关键词] 微小RNA-23a；p21活化激酶6；基质金属蛋白酶9；非小细胞肺癌 [中图分类号] R363 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000．4718．2014．O1．O11 PAK6signalingattenuatesmigratory and invasiveabilitiesofnon-small celllungcancercells CAISong—wang，LIDong—xia ，ANJun ，ZHANGJun-hang (D‘epartmentofCardiothoracicSu~ery，The AffiliatedHospital，SunYat-senUniversity，Guangzhou510630，China； LaboratoryofFunctionalScience，XinxiangMedcialCollege，Xdnxaing453003，hCina．E-mail：junhang．zhang@gnmil． tom) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatetherolesofp21-activatedkinase6(PAK6)anditstargetmiRNAonthemi- gratoryandinvasiveabilitiesofnon-smallcelllungcnacercells．M ETHODS：miRNA cnadidatestargetingPAK6were predictedbyatragetpredictionprogram．TheexpressionofPAK6wasmeas~edbyreal—timePCRandWestern blottingaf- terA549cellswere transfectedwithmiR-23amimicsorinh