RNA干扰MAGEA3对人肝癌细胞凋亡的影响.pdfVIP

维普资讯 · 2372· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2006，22(12)：2372—2376 [文章编号] 1000—4718(2006)l2—2372-05 RNA干扰 MAGEA3对人肝癌细胞凋亡的影响 李文瑜 ， 郭爱林 ， 杨素清 ， 胡少为 ， 文剑明 (广东省人民医院肿瘤中心，医学研究中心，广东 广州 510080； 中山大学医学院病理教研室，广东 广州 510080) [摘 要] 目的：探讨小发夹 RNA(shRNA)载体介导抑制人肝癌细胞中黑色素瘤相关抗原A3(MAGEA3)的 表达和对肝癌细胞凋亡的影响。方法：构建pSilencer—MAGEA3短发夹状 siRNA真核基因表达载体，采用脂质体介 导的方法将其转染到人肝癌细胞 (mel—ed1)中，用 Western印迹法 、RT—PCR检测MAGEA3基因在肝癌细胞中的表 达；通过原位末端标记 TUNEL法、DNA片段化及AnnexinV ／PI双标记法检测，观察其对肝癌细胞凋亡的影响。结 果：成功构建pSilencer—MAGEA3短发夹状 siRNA真核基因表达载体，转染特异性小发夹 RNA质粒表达载体的 MEL—EDI细胞中MAGEA3基因表达显著抑制 (90％)。与对照组 比较 ，pSilencer—MAGEA3转染组肝癌细胞培养 48h后，DNA片段化检测出 “DNAladder”、TUNEL法显示细胞典型凋亡特征，AnnexinV／PI双标检测转染组细胞凋 亡率为21．4l％±1．98％，明显高于pSilencer—neo空载体转染组和未转染组 (P0．01)。结论：MAGEA3小发夹 RNA质粒载体可显著抑制MEL—EDI细胞中的MAGEA3基因的表达，促进肝癌细胞的凋亡，MAGEA3基因具有抑制 凋亡的作用。该研究为应用RNAi进行肿瘤的基因治疗提供了实验依据。 [关键词] RNA干扰 ；黑色素瘤相关抗原A3；肝肿瘤 ；细胞凋亡 [中图分类号] R737．31 [文献标识码] A EffectsofMAGEA3inhibitionbyshRNA onapoptosisinhumanhepatocel— lularcancercells LIW en—yu。 GUO Ai—lin。 YANG Su—qing。 HU Shao—wel’，WENJian—ming ， ， ， (CancerCenter，MedicalResearchCenter，GuangdongProvincalPeoplesHospital，Guangzhou510080，China； Depart— meritofPathology，ZhongshanMedcialColelge，SunYat—senUniversity，Guangzhou510080．China) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatetheinhibitoryeffectofvector—basedRNAinterference(RNAi)ontheexpres— sionofmelanomaassociatedantigenA3(MAGEA3)proteininhepatocellularcarcinomacellsandonapotposisofhepatoce1． 1ularcarcinomacells．METHODS：AvectorfortranscribingspecificsmallhairpinRNA (shRNA)targetingMAGEA3gene wasconstructed ，introducedintohepatocellulra cracinomaMEL—ED