NKX3.1下调前列腺癌PC-3细胞中抗凋亡基因bcl-2的表达.pdfVIP

理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2011，27(10)：1902—1906 [文章编号] 1000-4718(2011)l0—1902—05 NKX3．1下调前列腺癌 PC一3细胞 中抗凋亡基 因bcl一2的表达 ；=l 陈兆波， 刘春艳，倪娜娜， 于 洋， 张鹏举， 陈蔚文， 崔福爱， 姜安丽 (山东大学医学院生物化学与分子生物学研究所，山东 济南 250012) [摘 要] 目的：研究前列腺特异转录因子 NKX3．1对 bcl一2基因表达以及前列腺癌细胞凋亡的影响。方 法：转染 pcDNA3．1一NKX3．J于前列腺癌PC一3细胞中，得到瞬时转染NKX3．1的PC一3细胞 ，通过 RT—PCR和 Westernblotting方法研究 NKX3．1对6cZ一2基因的表达的影响，并通过EMSA技术 ，研究NKX3．1诱导6cZ一2基因 下调的分子机制；进一步通过流式细胞术 、凋亡小体染色等方法研究NKX3．1对细胞凋亡的影响。结果：NKX3．1 可明显下调PC一3细胞中bcl一2mRNA及Bcl一2蛋白的表达 ；EMSA结果证明NKX3．1可与bcl一2基因上游调控 区中的NKX3．1结合元件相互作用；流式细胞术结果显示，PC一3细胞转染 NKX3．1后，细胞凋亡数增加了1．41 倍；用Hoechst33258细胞染色发现NKX3．1可使PC一3细胞凋亡小体数量明显增加。结论：NKX3．1可下调抗凋 亡基因bcl一2的表达，促进前列腺癌细胞凋亡。 [关键词] NKX3．1蛋白；PC一3细胞；基因，bcl一2；细胞凋亡 【中图分类号] R737．25 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2011．10．009 NKX3．1 down —regulatesbcl一2 gene expression in prostate cancer PC一3cells CHENZhao—bo，LIUChun一’yan，NINa—na，YUYang，ZHANGPeng—jU，CHENWei — wen．CUIFu—ai．JIANGAn—li (InstituteofBiochemistryandMolecularBiology，SchoolofMedicine，ShandongUnivemi@，Jinan250012，China．E— mail：fianganli@sdu．edu．Cn) [ABSTRACT] AIM：ToinvestigatetheeffectofNKX3．1onthegeneexpressionofbcl一2andapoptosisinpros— tatecna cerPC一3ceHs．M ETHODS：TheeukaryoticexpressionplasmidpcDNA3．1一NKX3．Jwastrnasientlytransfected intoPC一3cells．RT—PCR nadWesternblottingwereusedtodetecttheeffectsofNKX3．1ontheexpressionofbcl一2 gene．Down—regulatoryeffectofNKX3．1onbcl-2genewasdetectedbyEMSA．Flow cytometrynadapoptoticbodystai— ningwerecarriedouttostudytheeffectsofNKX3．1onapoptosisofPC一3cells．RESULTS：Th emRNA andproteinex- pressionofbcl一2inPC一3 cellswasdown—regulatedbyover—expressionofNKX3．1．TheEMSA resultshowedthat NKX3．1interactedwiht hteNKX3．1bindingelementsinupstream regulatoryregionofbcl-2gene．Theresultsofflowcy- t