Norrin基因对人视网膜微血管内皮细胞增殖和周期的影响.pdfVIP

维普资讯 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2007，23(4)：639—643 · 639 · [文章编号] 1000—4718(2007)04—0639—05 Norrin基因对人视网膜微血管 内皮 细胞增殖和周期的影响术 丁小燕， 李 涛， 谢素贞， 马红婕， 李 斌， 唐仕波 (中山大学中山眼科中心，广东 广州510060) [摘 要] 目的：体外培养并鉴定人视网膜微血管内皮细胞 (HRCECs)，并探讨Norrin基因高表达对 HRCECs 增殖和周期的影响。方法：体外分离 、培养并鉴定人视网膜微血管内皮细胞 ，抗第Ⅷ因子相关抗原抗体鉴定细胞。 利用脂质体 lipofeetamine2000将AP一3mye—hNorrin／pRK5质粒转染HRCECs，RT—PCR、免疫组化和Westernblot— ting方法检测Norrin／mye的表达确定转染效率。采用Mrrr法测定转染后细胞的增殖能力，流式细胞术分析其细胞 周期变化。结果 ：所培养的细胞第Ⅷ因子相关抗原免疫组化为强阳性。AP一3mye—hNorrin／pRK5质粒转染后 24h，RT—PCR显示实验组 Nonin表达水平明显高于阴性对照组(P0．01)。转染后48h免疫组化及Westernblot— ting均显示实验组细胞Myc表达强于阴性对照组。MTF法显示细胞增殖高于对照组 ，细胞周期检测示实验组 G： 期细胞高于阴性对照组 ，P0．01。结论：脂质体能成功转染AP一3myc—hNorrin／pRK5进入HRCECs。Norrin高表 达能促进 HRCECs的增殖，并促进细胞 DNA合成，提示 Norrin在视网膜血管生成过程中可能具有重要作用。 [关键词] 基因，Norrin；视网膜血管；细胞增殖 ；细胞周期 [中图分类号] R363 [文献标识码] A EffectsofNorringeneontheproliferationandcellcycleofhumanretinal capillaryendothelialcells DINGXiao—yan，LITao，XIESu—zhen，MAHong—jie，LIBin，TANGShi—bo (ZhongshanOphthalmicCenter，SunYet—senUniversity，Guangzhou510060，China．E—mail：tangsb@mail．sysu．edu．cn) 『ABSTRACT1 AIM：Toisolate，cultivateandidentifyhumanretinalcapillaryendothelialcells(HRCECs)，and toassesstheeffectsofhighexpressionofNorrin geneontheproliferationandcellcycleofHRCECs．METHODS：The culturedcellswereidentifiedwithanti—factorVIIIrelatedantigen．AP一3myc—hNorrin／pRK5weretransfeetedintocul— turedHRCECsinvitrobylipofeetamine2000．Theirtransfectionefficiencyweremeasured byRT—PCR，immunohisto— chemistry andWestern blotting，respectively．Itseffectsoncellproliferationandcellcycleweredetected．RESULTS：Th e cuIturedcellswereidentifiedwithimmunochemicallvpositivebrownstaining．Incomparison