HBx蛋白对IGF-Ⅱ基因P4启动子活性的影响.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysi01o ! f!)；!二 · ，7 · [文章编号] 1000—4718(2010)0l一0007—05 HBx蛋 白对 IGF—II基因P4启动子活性的影响 汤绍辉 ， 曲春晖 ， 杨敏英 ， 罗羽宏 ， 杨冬华 (暨南大学附属第一医院 消化科，普通外科 ，广东广州 510630) [摘 要】 目的：构建乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)表达载体pEYFP—C1一X及人 IGF—II基因P4启动子调 控的荧光素酶报告载体pGL3一P4，并初步探讨HBx对IGF—II基因P4启动子活性的影响。方法：应用基因重组技 术，将HBx基因及P4启动子分别克隆人pEYFP—CI及 pGL3一Basic载体，构建重组质粒pEYFP—cl—x及pGL3 一 P4；将pEYFP—C1一X稳定转染HepG2细胞，进行G418筛选；将体外甲基化pGL3一P4瞬时转染HepG2一EYFP — x细胞，采用双荧光素酶实验检测 P4启动子的转录调控活性。结果：(1)经酶切及测序鉴定，重组质粒中的 目的 片段HBx和P4启动子的大小分别为465bp及 1246 bp，序列与GenBank数据库一致。(2)获得了表达HBx的细 胞系HepG2一EYFP—X，在荧光显微镜下呈现黄绿色荧光。(3)转染HepG2一EYFP—x细胞的甲基化 P4启动子 的荧光素酶活性明显高于其对照细胞HepG2一EYFP(P0．O1)。结论：HBx可增加P4启动子的转录活性。 [关键词] 乙型肝炎病毒x蛋白；1)4启动子；转录活性 [中图分类号] R735 [文献标识码] A EffectofanxontranscriptionalactivityofIGF—-H gene1)4promoter TANGShao—hui，QUChun—hui，YANGMin—ying，LUOYu—hong，YANGDong — hua (DepartmentofGastroenterology，DepartmentofGeneralSurgery，TheFirstAffiliatedHospitalofJinanUniversity，Guang— zhou510630，China．E—mail：thyluo@tom．eom) [ABSTRACT] AIM ：ToconstructHBxeukaryoticexpressionvectorpEYFP—C1一Xandeukaryoticexpression vectorpGL3—-P4drivenbyP4promoterofhumanIGF——IIgeneandtoinvestigatetheeffectofHBxonthetranscriptionac— tivityofIGF—IIgeneP4promoter．METHODS：HBxgeneandP4promoterswereclonedintopEYFP—C1andpGL3一 basicvectorsrespectivelybygenerecombinationtechniquestoconstructrecombinantplasmidspEYFP—·C1——X andpGL3 一 P4．HepG2cellsweretransfectedwithpEYFP—Cl—X andtheresistantcellcloneswereselectedbyG418．Thenmeth— ylatedpGL3一P4wastrnasientlytransfectedintotheabovecellclones，andthetranscriptionactivityofP4promoterWaSde— terminedbydual—luciferasereporterassaysystem．RESULTS：(1)AimfragmentsHBxgeneandP4promoterthatwere clonedwere465bpand1246bp，respectivelyandtheDNAsequenceswereaccordnatwithGenBankdataconfir