HIF-1α基因沉默对大鼠肝癌CBRH-7919细胞p27和Ki67表达的影响.pdfVIP

理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2012128(10)：1825-1829 · 1825 · [文章编号] 1000-4718(2012)10—1825—05 HIF— 基因沉默对大 鼠肝癌 CBRH一7919细胞 p27和 Ki67表达的影响 许林锋 ，倪嘉延 ， 陈耀庭 ，孙宏亮 ， 吴裕丹 (中山大学孙逸仙纪念医院 介入放射科，血液科 ，广东 广州 510120) [摘 要] 目的：探讨沉默缺氧诱导因子let(hypoxia—induciblefactorla，HIF—J)基因对大 鼠肝癌CBRH一 7919细胞在缺氧状态下027和Ki67表达的影响。方法：选用大鼠肝癌细胞株 CBRH一7919作为研究对象，利用氯 化钻 (CoC1)模拟缺氧状态。构建HIF—letsiRNA特异性载体，利用小分子RNA干扰技术沉默肝癌细胞HIF—J 基因。应用real—timeRT—PCR和Westernblotting方法分别检测肝癌细胞 HIF—letmRNA和蛋白的表达变化，用 Westernblotting方法检测肝癌细胞 p27和Ki67蛋白的表达变化。应用流式细胞术检测细胞周期的变化。结果： 在缺氧条件下，肝癌细胞HIF—lotmRNA及蛋白表达显著增多(P0．05)。肼 —J 基因被沉默后 ，HIF—letmR- NA和蛋白表达以及Ki67蛋白表达量明显减少(P0．05)，p27蛋白表达量显著增多(P0．05)。转染组Go／G。期 的肝癌细胞数量明显多于对照组，s期细胞显著减少(P0．05)。结论：缺氧可以诱导肝癌细胞 HIF—let的表达； 特异性siRNA沉默 UF—J ，可能通过促进p27的表达和抑制Ki67的表达，在一定程度上抑制了肝癌细胞的增殖。 [关键词] 缺氧诱导因子 let；RNA干扰；027蛋白；Ki67蛋白；CBRH一7919细胞 [中图分类号] R735．2 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2012．10．017 EffectsofHIF—J silencingonexpression0fp27andKi67inrathepato- macelllineCBRH 一7919 XULin—feng ，NIJia—yan ，CHENYao—ting ，SUNHong—liang ，WUYu—dan (DepartmentofInterventionalRadiology2DepartmentofHematology，SunYat—senMemorialHospital，SunYat—senUni- verstiy。Guangzhou510120，China．E—ma il：danwuxu@163．corn) [ABSTRACT] AIM：Tostudytheeffectofhypoxia—induciblefactorlet(HIF—let)silencingontheexpression 0fp27andKi67inrathepatomacelllineCBRH一7919underhypoxia．METHODS：Hypoxicconditionwasinducedby CoC12andtheexpressionofHIF—lawassilencedbysmallinterferenceRNA．HIF—J 一specificRNAilentiviralvector wasconstructed．Real—timeRT—PCR nadWestern blottingwereusedtodetecttheexpressionofHIF—letatmRNA nad proteinlevelsinCBRH 一7919censunderhypoxia．Theexpre