SH—SY5Y细胞高表达糖原合成激酶3β对tau蛋白磷酸化和微管稳定性的影响术.pdfVIP

· 254 · 生旦痘理生理苤鲞 r】seJournalofPathophysiology 2009，25(2)：254—258 [文章编号] 1000～4718(2009)02—0254—05 SH—SY5Y细胞高表达糖原合成激酶313对 tau蛋白 磷酸化和微管稳定性的影响术 沈 杰 ， 陈晓春 ， 林 旭 ， 张 静 (福建医科大学 附属协和医院神经科 ，神经生物学研究中心，分子医学研究中心，福建福州350001) [摘 要] 目的：构建高表达糖原合成激酶3B(GSK313)的SH—SY5Y(人骨髓神经母细胞瘤细胞)转基因细 胞模型，观察 GSK331高表达对宿主细胞tau蛋白磷酸化、微管稳定性的影响。方法：构建GSK331真核表达质粒，转 染sH—SY5Y细胞，使 GSK331在SH—SY5Y细胞中得到高表达，应用蛋白免疫印迹方法，观察tau蛋白磷酸化、总 tau蛋A、微管蛋白乙酰化水平的变化情况。结果：GSK3IS真核表达质粒转染SH—SY5Y细胞36h后，GSK331在 sH—SY5Y细胞中的表达达到高峰，tau蛋白Ser以蛇、Thrz、Thr。等位点的磷酸化水平在转染后48h达到高峰； tau蛋白总量未有明显变化。转染后60h，微管蛋白乙酰化水平明显减低。结论：高表达 GSK331的SH—SY5Y细胞 可使tau蛋白的磷酸化水平增高，从而降低tau蛋白结合和稳定微管蛋白的能力，导致微管蛋白乙酰化水平明显减低。 [关键词] 糖原合成激酶3B；tau蛋白质类 ；磷酸化；微管蛋白 [中图分类号] R592 [文献标识码] A Glycogen synthasekinase——3 beta overexpression enhancestau protein phOsph0rylationandattenuatestubulinacetyrlationinSH —SY5Y cells SHENJie ，CHENXiao～chun ，LINXu ，ZHANGJing (C‘enterofNeuroboilogy，TheAffiliatedUnionHospital，CenterofMolecularMedicine，FujianMedicalUniversity，Fuzhou 350001，China．E—mail：chenxc998@sohu．con) [ABSTRACT] AIM：ToconstructGSK331一overexpressedSH～SY5YcellsandtoobservetheeffectsofGSK313 一 overexpressionontauproteinphosphorylationandtubulinacetylationinSH—SY5Yengineeredcells．M ETHODS：The cDNAofGSK331constructwassubclonedintomammalianexpressionvectorpBudCE4．1．TheintegrityoftheGSK3[3con— structwasconfirmedbysequenceanalysis．GSK331wastransientlytransfectedintoSH ——SY5Y cellsusingLipo- fectamine2000．WesternblottingwasusedtomeasuredproteinlevelsofGSK331andphosphorylatingGSK331，aswellas， thetotaltauandphosphorylated tauprotein andaeetylated tubulin．RESULTS：36haftertransfection，thelevelsof GSK331andphosphorylatingGSK331inSH——SY5Ycellsweresignificantlyincreasedcomparedwithnon——transfeetiongroup andvectorgroup．After48h，thelevelsofphosphorylatedtauprotein(Se