siRNA沉默RALA基因影响人白血病K562细胞增殖和凋亡.pdfVIP

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中国病理生理

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 201238(4):625_630 · 625 · [文章编号] 1000-4718(2012)04—0625—06 siRNA沉默 基 因 影响人 白血病 K562细胞增殖和凋亡术 李育敏 ,朱雪姣,谷景义, 费 嘉 (暨南大学医学院生物化学与分子生物学教研室,广东 广州 510632) [摘 要] 目的:研究小干扰RNA(siRNA)抑制v— 猴白血病病毒癌基因同系物 A(RALA)基因表达对人 慢性粒细胞性自血病K562细胞增殖和凋亡的影响。方法:利用Lipofectamine 2000将化学合成的RALAsiRNA 转染体外培养的K562细胞,四甲基偶氮唑蓝(Mrr)法检测 RALAsiRNA对K562细胞增殖的影响;台盼蓝拒染法 检测RALAsiRNA对 K562细胞存活率的影响;real—timePCR检测RALAmRNA表达水平 ;Westernblotting检测 RALA蛋白表达水平;annexinV/PI双染流式细胞仪检测RAIA siRNA对 I(562细胞凋亡的影响;Hoechst33258染色 荧光显微镜观察细胞形态学变化。结果:RALAsiRNA可明显抑制 l(562细胞内RALAmRNA和蛋 白的表达 (P 0.05);与阴性对照组相比,转染RALAsiRNA的K562细胞增殖明显受到抑制(P0.05);流式细胞术结果显示转染 RALAsiRNA的K562细胞凋亡较阴性对照组显著增加(P0.05);Hoechst33258染色见转染RALAsiRNA的I562细 胞出现典型的凋亡形态学变化。结论:癌基因RA/A在白血病发生发展过程中发挥重要作用。siRNA下调RAIA mRNA和蛋白的表达 ,可抑制人白血病K562细胞增殖 ,诱导细胞凋亡,提示RAL4可能是白血病治疗的新靶点。 [关键词] v—raJ猴白血病病毒癌基因同系物A;小干扰 RNA;白血病;细胞增殖;细胞凋亡 [中图分类号] R342.7 [文献标志码] A doi:10.3969/j.issn.1000—4718.2012.40.009 Knockdown ofRALA bysiRNA inhibitscellproliferationandinducesapop- tosisinhumna leukemicK562cells U Ylu—min,ZHUXue—jiao,GUJing—yi,FEIJia (DepaamemofBiochemistryandMolecularBiology,SchoolofMedicine, 阮nUnivemity,Guzmgzhou510632,China.E— mail:efe~ia@163.com) [ABSTRACT] AIM..ToinvestigatetheeffectofsiRNA—inducedknockdownofv—ralsimianleukemiaviraloneo— genehomologA(RAL4)onproliferationandapeptosisofchronicmyelogenousleukemia(CML)l562cells.METHODS: ThechemicallysynthesizedsiRNA targetingtoRAM genewastrnasfectedintoK562cellsusingLipofeetamineMT 2OOO.Th e ,proliferationandviabilityofK562cellsweredetectedbyMTrassayandtrypna bluedyeexclusion.Th eexpressionlevelsof . RALAmRNAnadproteinweredetermine

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