靶向MRP1基因的shRNA稳定逆转肺癌的多药耐药性.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2011，27(12)：2265—2269 · 2265 · [文章编号】 1000—4718(2011)12—2265-05 靶向MRP1基因的shRNA稳定逆转肺癌的多药耐药性米 邵淑丽 ， 崔婷婷， 贾红双， 谢振丽， 张伟伟， 刘 迁， 陈薇薇， 李 爽， 陈 丽 (齐齐哈尔大学生命科学与农林学院，黑龙江 齐齐哈尔 161006) [摘 要】 目的：利用短发夹 RNA(shRNA)表达载体逆转肺癌细胞株 (A549／DDP)的多药耐药性。方法：构 建2个多药耐药相关蛋白1(MRP1)基因特异的shRNA表达载体pSilencer2．1一U6neo—MRP1，稳定电转染A549／ DDP细胞 ，实时荧光定量PCR分析MRP1mRNA的表达，免疫荧光检测细胞MRP1蛋白的表达，流式细胞术检测细 胞内罗丹明123(Rho123)的潴留情况。MTr法检测细胞活力。结果：成功构建了shRNA表达载体pSilencer2．1一 U6neo—MRP1，稳定转染 sh—MRP1—2．1—1和 sh—MRP1—2．1—2后，A549／DDP细胞 MRP1mRNA和蛋白表达 均显著降低，细胞内Rho123相对荧光强度由16．93％ ±0．58％分别升高至89．02％ ±0．59％和82．56％±1．37％； A549／DDP亲本细胞顺铂 的 Ic 分别 由(101．45±0．64)I~mol／L降至 (38．06±0．05)p~mol／L和(53．72±0．36) i~mol／L，5一氟尿嘧啶的Ic50分别由(263．20±2．00)Ixmol／L降至(98．82±1．16)l~mol／L和(141．81±0．49)p~mol／ L。结论：shRNA干扰表达载体pSilencer2．1一U6neo—RMP1能够稳定、持久地抑制MRP1基因，有效地逆转了 A549／DDP细胞的多药耐药性。 [关键词] 短发夹RNA；多药耐药；多药耐药相关蛋白1；RNA干扰 ；A549／DDP细胞 [中图分类号] R734．2 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．20H．12．005 StablereversalofmuitidrugresistanceinA549／DDPcellsbyshRNA tar． getingMRP1gene SHAOShu—li，CUITing—ting，JIA Hong—shuang，XIEZhen—li，ZHANGWei—wei， UUQian，CHENWei—wei，LIShuang，CHENLi (CollegeofLifeSciencesandAgriculturea,idForestry，QiqiharUniversity，Qiqihar161006，China．E—mail：shshl32@ 163．com) [ABSTRACT] AIM ：Toreversemuhidrugresistance(MDR)ofA549／DDPceliswithshoahairpinRNA (shR— NA)expressionvectors．METHODS：Twomuhidrugresistance—associatedprotein1(MRP1)gene—specificshRNAex— pressionplasmidspSilencer2．1一U6neo—MRP1wereconstructedandintroducedintoA549／DDPcells．MRP1mRNA wasassayedbyreal—timefluorescentquantitativePCR．TheMRP1functionwasdeterminedbyrhodamine123(Rho123) retentionandtheproteinexpressionofMRP1wasdetectedbyimmunofluorescentstaining．TheviabilityofA549／DDPcells wasevaluatedbyMTrmethod．RESULTS：MRP1shRNA e