沉默Notchl基因促进人乳腺癌MCF-7细胞JNKl和p53磷酸化.pdfVIP

· 1014 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2013，29(6)：1014-1020 [文章编号] 1000-4718(2013)06-1014·06 沉默Notchl基因促进人乳腺癌 MCF．7细胞 JNK1和 p53磷酸化 袁 磊， 陈旭东， 范文娟， 杨旭光， 王建国 (漯河医学高等专科学校 ，河南 漯河462002) [摘 要] 目的：探究沉默Notchl基因对人乳腺癌MCF-7细胞JNK1和p53磷酸化的影响。方法：选取人乳 腺癌MCF-7细胞作为研究对象，构建shRNA—Notehl真核表达质粒用于转染 MCF-7细胞使Notch1基因沉默。采用 Westernblotting方法检测MCF-7细胞 Notch1、Hes．1、PUMA和NOXA蛋白的表达，JNK1和053蛋白磷酸化水平以 及caspase-3活化水平的改变。应用流式细胞术检测细胞凋亡和线粒体膜电位的变化。结果：人乳腺癌 MCF-7细 胞Notch1基因被沉默后 ，Notchl和Hes-1蛋白表达量明显减少(P0．O1)，细胞凋亡率显著升高(P0．01)，JNK1 和053的磷酸化水平明显高于对照组 (P0．01)，PUMA和NOXA表达量显著升高(P0．05)，cleavedcaspase-3蛋 白明显多于对照组(P0．01)，线粒体膜电位明显下降(P0．05)。结论：沉默Notch1基因可能通过激活JNK1信 号通路活化053，促进PUMA和NOXA蛋白表达，进而通过线粒体途径导致人乳腺癌MCF-7细胞凋亡。 [关键词] Notchl蛋白；短发夹RNA；JNK1蛋白；p53蛋白；MCF-7细胞 [中图分类号] R737．9 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000-4718．2013．06．010 Notch-1genesilencingpromotesphosphorylationsofJNK1andp53inhu- manbreastcancerMCF_7cells YUANLei，CHENXu-dong，FANWen-juan，YANGXu—guang，WANGJian—guo (LuoheMedicalCollege，Luohe462002，China．E-mail：wr0395@sina．corn) [ABSTRACT] AIM：ToinvestigatetheeffectofNotchlgenesilencingonphosphorylationsofJNK1and053in humna breastcnacerMCF-7cells．METHODS：shRNA—Notchleukaryoticexpressionplasmidwasconstructedandtrans— fectedintoMCF-7cells．TheexpressionofNotch1andHes一1wasobservedbyWestem blottingaftertransfction．Apoptosis andmitochondrialmembranepotentialweredetectedbyflow cytometry．Western blottingwasalsoused todeterminethe proteinlevelsofp-JNK1，p-053，PUMA，NOXAandcleavedcaspase-3afterNotch1silencingWasperformedinMCF-7 cells．RESULTS：SilencingofNowhlsignificantlyreducedtheexpressionofNotch1nadHes-1inMCF-7cells(P 0．O1)．InshNotchlgroup，thenumberofapoptoficcellswasmuchhigher(P0．叭)nadmitochondrialmembrnaepoten— tialwasmuchlower(P0．05)thna t